-
弓形虫分泌蛋白ROP2的原核重组表达与免疫反应性鉴定
本研究在大肠杆菌工程菌中重组表达弓形虫棒状体蛋白2 (ROP2),并初步评价其免疫反应性.主要步骤为体外细胞培养速殖子,提取总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增ROP2基因全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌RosettaTM (DE3) pLysS工程菌中诱导表达重组融合蛋白GST-6×His-ROP2,最后以重组蛋白与人源弓形虫抗血清的Western blotting反应评价rROP2免疫反应性.本研究获得了ROP2全长重组蛋白,初步证明其良好的免疫反应性,为进一步改进弓形虫免疫学诊断方法,研究分泌蛋白与宿主细胞的相互作用奠定了基础.薛峰,黄敏君,洪彩玲,杨英超,甘绍伯,谷俊朝 - 寄生虫与医学昆虫学报文章来源： 万方数据 -
猪甲状腺激素应答基因SPOTl4(THRSP)的原核表达及其融合蛋白的亲和纯化
甲状腺激素应答基因(thyroid hormone responsive SPOTl4,THR5P)是受甲状腺激素诱导表达的核内基因,参与脂肪合成代谢途径限速酶的转录调控,对动物脂肪生成具有重要的调控作用.为进一步研究猪SPOTl4基因所编码蛋白质的生物学功能,本实验将猪SPOTl4(GenBank登录号:JF951726)的ORF片段与表达载体pET一280ff+)进行重组,获得的重组子pET一280ff+).S14,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)感受态细胞,重组菌经IPTG诱导,通过SDS.PAGE分析显示,目的蛋白分子量约为20.91kD,且主要以包涵体形式存在,最佳诱导条件是37℃1mmol/LIPTG诱导5h.将获得的包涵体用6xHisNi-NTA纯化柱纯化后,采用Westemblot进一步检测到了21kD目的蛋白的表达.重组质粒pET.280L(+)一S14在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地得到了表达,不仅为SPOTl4基因生物学功能的研究,而且为进一步研究S14蛋白功能,了解脂肪代谢调控机制提供了基础资料.王丛梅,郭豫杰,李宏基,韩立强,李奎,杨国宇 - 农业生物技术学报文章来源： 万方数据 -
绵羊肺炎支原体标准株Y98外膜蛋白MOP30基因真核表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达
以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma oumvipneoniae,MO)标准株Y98基因组为模板,设计1对特异引物,PCR扩增得到798bp的P30目的基因(MOP30),将其定向克隆到pMD19-T Simple载体中进行测序分析.重组质粒进行XbaⅠ/BamHⅠ双酶切并回收目的片段,将目的基因亚克隆入黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)表达载体pCAMBIA1300-YFP中构建重组融合表达质粒pCAMBIA1300-MOP30-YFP.双酶切验证后的融合表达质粒转化农杆菌(Agrobacterium)感受态细胞,侵染烟草(tobacco)叶片.通过激光共聚焦成像显微镜(cofocal imagingmicroscope)观察到融合表达的黄色荧光蛋白,Western-blotting试验得到57 000的特异条带,RT-PCR检测到MOP30基因在烟草叶片中转录.MOP30-YFP融合蛋白在烟草中的成功表达,为转基因植物疫苗防治绵羊支原体肺炎奠定了基础.张亚宁,赵利峰,张乐祎,赵宝华 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA的构建及其在猪成纤维细胞的表达
α-乳清蛋白(α-lactalbumin,α-LA)是哺乳动物乳汁中一种重要的蛋白质,富含机体必需氨基酸和支链氨基酸,其极佳的氨基酸比例、易吸收性以及功能特异性,使得α-LA在婴幼儿个体正常生长中具有重要的意义.本实验旨在构建人α-乳清蛋白真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA,将其转染至猪(Sus scrofa)的成纤维细胞,获得稳定表达人仪一LA的细胞.根据猪基因密码子偏爱性优化并合成人α-乳清蛋白基因mRNA序列opLA,并将其定向克隆入pIRES2一ZsGreenl真核表达载体,双酶切及测序方法鉴定重组载体;脂质体介导的方法将载体转染入培养的猪成纤维细胞,荧光显微镜下观察转染效果,G418抗性筛选重组细胞;RT-PCR方法检测目的基因的表达.结果表明,通过酶切以及测序鉴定得到的重组载体pIRES2一ZsGreenl-opLA构建成功;荧光显微镜下观察,转染了plRES2-ZsGreenl-opLA和pIRES2一ZsGreenl空载体的细胞均发出绿色荧光,且荧光多集中于细胞核;筛选重组细胞的最小G418浓度为400ng/μL;RT-PCR法检测到与目的基因大小一致的片段,而未转染组和转染空载体组均未检测到.本实验成功构建真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA,并获得稳定表达目的基因的猪成纤维细胞,该细胞可作为进一步研究转基因克隆猪的供体细胞.李艳玲,王颖,党文庆,郝柱,徐宁迎,张金枝 - 农业生物技术学报文章来源： 万方数据 -
放射性束物理实验发展现状
近年来随着放射性束流装置的发展,对非稳定核的研究取得了一系列的重大进展.重要的物理发现包括滴线区的晕核与增强的集团结构、非稳定核中的壳演化与新幻数、新的有效相互作用、新的集体运动模式、核反应中的多步过程与强耦合效应等.本文着重从实验探测的角度,对非稳定核基态基本物理量的测量、非稳定核的衰变测量、中低能核反应、快速束流及零度谱学等方面做了概述和分析,特别指出他们在非稳定核研究中作用和新发展.李阔昂,叶沿林 - 核技术文章来源： 万方数据 -
人LMP-1基因腺病毒蚕组体的构建及其在骨肉瘤细胞U20S中的表达
目的:构建表达人LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)基因的腺病毒重组体,体外感染骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)细胞系U2OS,并鉴定LMP-1基因在U2OS中的表达.方法:以K562细胞的cDNA为文库,采用PCR方法对LMP-1进行扩增,通过TA克隆与pGEM-T载体连接并DNA测序.双酶切后并将目的基因插入至腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,对腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1行双酶切和DNA测序鉴定,并通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测pAdtrack-CMV-LMP-1在HEK-293T细胞中的表达.线性化pAdtrack-CMV-LMP-1,在BJ5183菌内完成与骨架质粒pAdeasy-1的同源重组,构建重组腺病毒质粒Ad-LMP-1.通过脂质体介导,在HEK-293A细胞内包装出复制缺陷的重组腺病毒Ad-LMP-1,大量扩增、纯化并测定滴度.用Ad-LMP-1感染OS细胞系U2OS,通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测LMP-1在U2OS细胞中的表达.结果:双酶切和DNA测序鉴定穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1构建成功,荧光显微镜证实转染了pAdtrack-CMV-LMP-1质粒的HEK-293T细胞内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot验证了LMP-1基因的表达量明显高于对照组.通过扩增、纯化,Ad-LMP-1滴度达到1.5*109pfu/ml.荧光显微镜下观察重组腺病毒感染的U2OS内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot检测发现重组腺病毒感染U2OS后,LMP-1的mRNA和蛋白表达量明显高于对照组.结论:成功构建了人LMP-1基因腺病毒重组体,为进一步的实验研究奠定了基础.刘会文,黄路,韩智敏,罗嘉全,杨东,詹平,戴闽,曹凯 - 重庆医科大学学报文章来源： 万方数据 -
人疱疹病毒6型感染的研究进展
人疱疹病毒6型(Human Herpesvirus 6,HHV-6)是一种嗜人T淋巴细胞的双链DNA病毒,属于疱疹病毒β亚科,1986年首次从艾滋病患者和淋巴增生异常患者的末梢血中的单核细胞分离得到.HHV-6有显著的嗜淋巴细胞性和嗜神经性,儿科诸多疾病与其感染有关,如幼儿急疹、器官移植后感染等.HHV-6可侵入神经系王楚,詹学 - 儿科药学杂志文章来源： 万方数据 -
小儿支原体肺炎炎性指标检查及临床意义
目的:检测不同年龄组肺炎支原体肺炎(MPP)患儿WBC、CRP、PCT水平的变化情况,分析不同年龄组患儿MP的药敏情况,探讨其临床意义.方法:对已确诊为MPP的108例患儿按年龄分为婴幼儿组、学龄前期组和学龄期组,检测血中WBC、CRP和PCT水平,分别比较各项指标在不同年龄的差异,同时分析各组患儿对阿奇霉素、喹诺酮类与红霉素的敏感性.结果:各年龄组患儿WBC、CRP和PCT水平均有升高,两两比较差异有统计学意义(P<0.05).婴幼儿组与学龄前期组、婴幼儿组与学龄期组、学龄前期组与学龄期组患儿MP对阿奇霉素、喹诺酮类、红霉素药敏情况比较差异无统计学意义(P>0.05);阿奇霉素与红霉素、喹诺酮类与红霉素各年龄组药敏情况比较差异有统计学意义(P<0.05).各年龄组患儿MP对阿奇霉素和喹诺酮类抗菌药物均较敏感,而对红霉素的敏感性则较低.结论:对于MPP患儿应及时行CRP、PCT和WBC检测,早期使用阿奇霉素治疗小儿MPP,可以有效提高治疗效果.陈琼,万耕宏,徐秀娟,黄志 - 儿科药学杂志文章来源： 万方数据 -
论工会利益整合-表达及其特点
以现代社会使用的利益整合和利益表达概念对工会利益整合-表达及其特点进行了界定和分析.工会是维护工人利益的组织,对工人的利益进行整合和表达是工会的重要职能,也是工会存在及其发展的基础.作为工会维护工人利益的必要过程和手段,利益整合与利益表达不仅具有主体的同一性,还具有过程的同一性.作为一种组织行为,工会利益整合-表达具有组织化程度高、组织成员数量多、与政党联系紧密等特点.刘勇 - 西北大学学报(哲学社会科学版)文章来源： 万方数据 -
小儿哮喘体外过敏原测试及脱敏治疗研究
目的:对小儿哮喘的体外过敏原进行分析及评价脱敏治疗的有效性.方法:对我院治疗的146例小儿哮喘患儿进行过敏原测试,采用吸入类和食物类等10种过敏原进行分析,并针对性的进行脱敏治疗.结果:粉尘螨的阳性率最高为56.8%,屋尘螨的阳性率为53.4%,霉菌的阳性率为43.8%,动物皮毛的阳性率为41.1%.通过针对性的脱敏治疗,治疗有效率可达89.0%,所有患儿血清总IgE水平在治疗后显著降低(P<0.01).脱敏治疗未见严重不良反应.结论:螨虫、霉菌和动物皮毛是小儿哮喘的主要过敏原,针对这些过敏原进行脱敏治疗可有效缓解小儿哮喘的过敏症状.沈立新 - 儿科药学杂志文章来源： 万方数据
科创中国
