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IPO8基因启动子区rs35100176位点变异对基因表达的影响
目的:研究人importin 8( IPO8)基因启动子区rs35100176多态性位点CCT插入/缺失对基因表达的影响。方法:PCR扩增IPO8基因启动子区包含rs35100176多态位点的342 bp序列,通过测序获得了49例DNA样本的基因多态性分布。以CCT/CCT插入纯合子或-/-缺失纯合子DNA样本为模板,扩增含有不同插入/缺失序列的IPO8基因启动子片段,插入萤光素酶报告质粒pGL3-Basic,构建pGL3-3N Insertion和pGL3-3N Deletion重组表达载体。重组质粒经Fugene 6.0转染入细胞,采用双萤光素酶报告系统,检测携带不同多态性序列的重组质粒中报告基因的表达活性;real-time PCR 检测各不同基因型细胞中 IPO8 mRNA 表达。结果:通过测序发现rs35100176多态位点存在 CCT/CCT、CCT/-和-/-3种表型,其基因分布频率分别为18.37%、55.10%和26.53%。成功构建pGL3-3N Insertion和pGL3-3N Deletion重组表达载体。双萤光素酶报告基因活性检测结果显示,pGL3-3N Insertion启动下游报告基因表达的相对活性与pGL3-3N Deletion 相比显著减弱,两者存在显著差异(P<0.05);real-time PCR结果显示,CCT纯合插入的HEK293细胞中IPO8 mRNA的表达显著低于CCT纯合缺失的Saos-2细胞。结论:IPO8基因启动子区rs35100176位点的CCT碱基插入变异能显著抑制启动子活性,从而影响IPO8基因的转录。熊建军,江和,许晓源,周小鸥,王庭,李卫东 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
CUL4B基因在结肠癌组织上调并促进HCT116细胞的增殖
目的观察CUL4B基因在结肠癌组织中的表达,以及对人结肠癌细胞株HCT116增殖能力的影响.方法运用实时定量荧光PCR(Real-time PCR)技术检测40例结肠癌及配对正常结肠黏膜中CUL4B mRNA的表达量,比较两者表达差异.构建pEGFP-N1-CUL4B真核表达载体,并通过脂质体质粒转染HCT116细胞,运用体外细胞毒性试验(MTT)法研究CUL4B对结肠癌HCT116细胞增殖功能的影响.结果 40例结肠癌组织中CUL4B mRNA表达水平ΔCt为13.21±1.33,对应正常组织表达水平ΔCt为18.61±1.86,结肠癌组织中CUL4B基因表达量明显高于配对正常结肠黏膜组织(P<0.05).MTT实验结果显示CUL4B可显著促进结肠癌HCT116细胞的增殖,HCT116-GFP-RKO组与阴性对照组、亲本细胞组对比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 UL4B在结肠癌组织中异常高表达,并且可促进结肠癌HCT116细胞株的增殖功能,可能在结肠癌发生发展中起重要作用.张顺霞,马丽园,姜韬 - 宁夏医学杂志文章来源： 万方数据 -
人类mtDNA D-Loop区位点变异对基因表达的影响
Case-Control研究表明,人线粒体基因(mtDNA) D-Loop区mt235、mt514-515、mt16183、mt16290和mt16319多态位点与有氧运动能力有关.拟从下游基因表达做进一步的研究,以探讨上述多态位点的分子调控机理.方法:采用全基因组合成法合成包含上述多态位点的DNA序列,分别连接到pGL3-promoter载体构建重组质粒,将重组质粒转染至293T细胞,观察携带5对mtDNA质粒对下游双荧光素酶报告基因的表达及荧光素酶mR-NA表达的影响.结果:携带mt235A、mt514-515CA、mt16183A和mt16319G的载体转染细胞的双荧光素酶基因表达量显著高于mt235G、mt514-515Del、mt16183C和mt16319A(P<0.01);携带mt16290两种基因型的质粒转染细胞报告基因表达没有明显差异.与pGL3-promoter载体相比,携带mt16319A的质粒转染细胞荧光素酶mRNA极显著下降(P<0.01),携带mt16290位点的两种质粒对报告基因mRNA的影响没有差异.结论:mt235、mt514-515、mt16183和mt16319多态位点影响荧光素酶基因表达,mt235A、mt514-515CA和mt16183A上调基因转录和翻译,mt16319A下调基因转录.这些基因表达上的差异可能是影响人有氧运动能力的重要调控因素.龚丽景,胡扬,李燕春,梅涛 - 体育科学文章来源： 万方数据 -
βⅢ-Tubulin过表达与ERG融合、PTEN缺失密切相关,是预测前列腺癌进展的独立因素
前列腺癌是西方国家男性最常见的恶性肿瘤之一.目前确立的预后指标包括Gleason分级、肿瘤范围、术前PSA水平以及临床分期等,但这些参数都不足以使个体化治疗决策达到最优化,为此,作者拟寻找更合适的生物学标记来全面了解前列腺癌的生物学行为.Tsourlakis M C,Weigand P,Grupp K,陈佳菁,林慧,余英豪 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
绵羊肺炎支原体标准株Y98外膜蛋白MOP30基因真核表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达
以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma oumvipneoniae,MO)标准株Y98基因组为模板,设计1对特异引物,PCR扩增得到798bp的P30目的基因(MOP30),将其定向克隆到pMD19-T Simple载体中进行测序分析.重组质粒进行XbaⅠ/BamHⅠ双酶切并回收目的片段,将目的基因亚克隆入黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)表达载体pCAMBIA1300-YFP中构建重组融合表达质粒pCAMBIA1300-MOP30-YFP.双酶切验证后的融合表达质粒转化农杆菌(Agrobacterium)感受态细胞,侵染烟草(tobacco)叶片.通过激光共聚焦成像显微镜(cofocal imagingmicroscope)观察到融合表达的黄色荧光蛋白,Western-blotting试验得到57 000的特异条带,RT-PCR检测到MOP30基因在烟草叶片中转录.MOP30-YFP融合蛋白在烟草中的成功表达,为转基因植物疫苗防治绵羊支原体肺炎奠定了基础.张亚宁,赵利峰,张乐祎,赵宝华 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
黑色素瘤患者错配修复蛋白MSH6高表达与预后不良相关
原发性黑色素瘤(PM)患者的临床预后不能完全用目前使用的临床组织病理学标准来解释,据报道DNA修复基因过表达与多种肿瘤的生物学行为有关,该研究着重对PM患者中错配修复蛋白的潜在预后价值进行评价.本组包括18例良性色素痣及101例Ⅰ~Ⅲ期PM标本,分别进行4种错配修复蛋白(MSH2、MSH6、MLH1及PMS2)的免疫组化染色,并且研究这些指标与疾病的临床病理变化及患者病死率Alvino E,Passarelli F,Cannavò E,王慧,余英豪 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
恙虫病东方体合肥分离株截短56 kDa蛋白抗原表达及活性分析
本文获得恙虫病东方体合肥分离株截短56 kDa外膜蛋白基因工程纯化抗原,并鉴定其免疫学活性,为进一步研制广谱诊断试剂、疫苗以及分析其在东方体致病的分子机制奠定基础.我们通过DNAStar和Mega等软件对含有440个氨基酸的合肥株56 kDa蛋白序列进行抗原性分析;将合肥株56 kDa截短蛋白基因克隆至原核表达载体pET28a获重组质粒,转入大肠杆菌E.coli BL21感受态中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析检测蛋白表达;采用亲和层析法纯化目的蛋白,Western-blot及ELISA法鉴定其免疫学活性.序列分析发现合肥分离株56 kDa蛋白可分为4个保守区和3个可变区,抗原性分析结果显示,其保守区的亲水性和抗原性均有很高峰值.SDS-PAGE电泳显示约56 kDa的目的重组蛋白表达条带,Western-blot分析显示该重组蛋白可与恙虫病病人血清反应,阴性血清则未出现相应印迹,ELISA分析结果显示该蛋白最低浓度为80 ng/μL时仍可检出阳性血清;5μg/mL蛋白可检测阳性血清滴度高达1∶12 800,证实其具有较强反应原性.本实验获得恙虫病东方体合肥株56 kDa截短外膜蛋白基因工程抗原具有良好的抗原活性,有望进一步应用于恙虫病的诊断、疫苗研制及致病机制分析.耿美玲,郑峰,吕恒,朱进,胡丹,郝丽娜,张凤玉,龚秀芳,李丙军 - 寄生虫与医学昆虫学报文章来源： 万方数据 -
唐氏综合征的全基因组基因表达失调结构域
21三体是最常见的引起认知损害的遗传病因.为了评价在21三染色体上基因表达的变化,并且消除基因组变异的干扰,Letourneau等研究了一对同卵双生儿21三体位点不一致的胚胎成纤维细胞的转录组,发现这对双胞胎基因组的某些结构域控制着基因的差异表达,在所有存在要么上调要么下调基因的染色体上,这些结构域均起作用.这些基因表达失调结构域(gene expression dysregulation domains,GEDDs)可用它们基因含量的表达水平所确定,而且在来源于孪生者成纤维细胞的诱导陈桂玲 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
多类别肿瘤基因表达谱的自动特征选择方法
从信息学角度出发寻找肿瘤相关基因、发现肿瘤基因表达特征对肿瘤的诊断和治疗具有重要的生物学意义,而肿瘤与正常组织的分类是其中一个重要应用.根据多类别肿瘤基因表达谱,提出了一种自动特征选择方法.首先,结合非参数方法和filter思想,利用决策序列的随机性度量基因的权值并排序;然后,采用相关信息熵进行冗余性排除,自动地选择出具有高分辨能力、低冗余度的特征基因子集.实验结果表明,提出的方法能从多类别肿瘤基因表达谱数据中自动选出30个具有良好分类能力的特征基因,且具有较高的正确识别率.高娟,王国胤,胡峰 - 计算机科学文章来源： 万方数据 -
花生生长素原初响应基因PNIAAs的表达模式分析
Aux/IAA基因能够在生长素诱导的早期做出响应.本研究通过筛选花生未成熟种子的cDNA文库,分离并获得了4个可能的Aux/IAA基因,分别命名为PNIAA1、PNIAA2、PNIAA3和PNIAA4.RT-PCR对表达模式的研究显示,四个基因在花生各组织中为组成型表达,且具有不同的时空表达模式和特征,PNIAA1、PNIAA2和PNIAA4主要在叶中表达,而PNIAA3在种子中表达量较高,推测其可能在种子发育过程中行使功能;IAA对花生诱导表达模式分析显示,四个基因经IAA诱导后在根部的表达模式均有变化,其中PNIAA1、PNIAA2和PNIAA3能被生长素迅速诱导.任怡怡,戴绍军,刘炜 - 中国油料作物学报文章来源： 万方数据
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