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应用PCR-DHPLC技术高通量快速检测转基因玉米
利用多重PCR结合DHPLC技术首次建立转基因玉米高通量快速检测方法.根据公布的转基因玉米外源基因序列设计并合成适合多重PCR的引物序列,以转基因玉米为模板,通过优化多重PCR和DHPLC的反应条件,建立一套同时快速筛选检测玉米中多种转基因成分的7重PCR-DHPLC检测方法.该方法的检测灵敏度为0.195 ng/μL,质粒检测灵敏度为1*103拷贝/μL.吴静,李铁柱,孙瑶,孙方达,栾凤侠,赵明超 - 玉米科学文章来源： 万方数据 -
猪葡萄球菌脱落毒素多重PCR检测方法的建立与初步应用
根据GenBank已发表的猪葡萄球菌的6种脱落毒素基因序列,设计合成了6对相应的特异性引物,通过特异性、敏感性和重复性试验建立了可行的多重PCR检测方法.用该方法对临床分离到的9株猪葡萄球菌进行检测,均扩增出了与预期大小相符的23SrDNA(662bp)条带;同时,其中6株分别扩增出了EXHA(316bp,2株)、EXHC(525bp,2株)和Shet-A(814bp,2株)基因特异性条带;另外3株均未扩增出任何毒素基因特异性条带,鉴定为无毒力菌株,以上结果与生化鉴定及单一PCR检测测序结果一致.结果表明,本试验所建立的多重PCR方法不仅操作快速方便、节约试验成本,而且具有高度特异性、敏感性和良好的重复性,可用于仔猪渗出性皮炎的诊断和猪葡萄球菌的快速鉴定.陈亚强,郝永清,张乐宜,蔡汝健,宋长绪 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
荧光定量PCR和酶联免疫吸附技术在手足口病肠道病毒快速检测中的应用比较
目的:比较荧光定量PCR(FQ-PCR)和酶联免疫吸附技术(ELISA)在手足口病肠道病毒快速检测中的应用价值.方法:选取疑似手足口病患儿200例,采集咽拭子、粪便、疱疹液标本232份,进行FQ-PCR检测,同时采用ELISA进行平行检测,比较两者的阳性检出率、灵敏度与特异性以及检测窗口期.结果:应用FQ-PCR方法,咽拭子、粪便、疱疹液中EV71、CoxA16、通用型肠道病毒核酸RNA的总阳性检出率分别为84.83%、81.82%、85.71%,差异无统计学意义(F=0.79,P>0.05).FQ-PCR方法咽拭子、粪便、疱疹液阳性检出率均高于ELISA法对血液的阳性检出率(χ2=3.17~5.11,P<0.05).FQ-PCR、ELISA诊断灵敏度分别为97.03%、87.50%(χ2=3.98,P<0.05),诊断特异性分别为97.22%、88.68%(χ2=3.85,P<0.05).在EV71、CoxA16及通用型肠道病毒方面,FQ-PCR的检测窗口期均早于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05).结论:FQ-PCR在手足口病肠道病毒快速检测方面优于ELISA,具有更高的阳性检出率、灵敏度与特异性,以及更早的检测窗口期,对手足口病的早期诊断具有较高的临床指导意义和推广应用价值.方静霞,沈丽萍,吴捍卫 - 儿科药学杂志文章来源： 万方数据 -
脑脊液中CRP、IGF-2、PCR及酶相关检测技术对化脓性脑膜炎的诊疗意义
化脓性脑膜炎是指化脓菌引起的一种急性软脑膜炎性反应,是儿科临床常见的感染性疾病.尤其是新生儿,其发生率、病死率及遗留严重后遗症的比例均较高,并且临床表现不典型,颅内压增高征出现较晚,又常缺乏脑膜刺激征,故早期诊断困难,需脑脊液检测结果支持.李小玉,邓春 - 儿科药学杂志文章来源： 万方数据 -
qRT-PCR检测石蜡包埋组织microRNA的研究进展
实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRTPCR)是一种具有高度敏感性和特异性的核酸定量分析技术,因其具有重复性好、定量准确等优点,已成为核酸检测的重要方法.microRNA是核酸家族中的重要成员,可使用qRT-PCR技术进行检测.由于microRNA具有其特殊性,与mRNA的检测方法不完全一样,仍需进行深入探讨qRT-PCR技术分析组织中microRNA的表达方式.现就该方面的研究进展作一综述.程凯,余波,王建东,石群立 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
茎一环RT-PCR法定量miRNA-421的引物设计
本研究旨在通过茎一环RT-PCR法,建立有效定量miRNA421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-d21,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎一环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎一环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点.赵丽,杨洋,温传俊 - 南京师大学报(自然科学版)文章来源： 万方数据 -
柑橘花器和种子中黄龙病菌的定量分布及应用
为准确、快速测定感病柑橘花器和种子中黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,Las)的含量,比较了SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(SGI-qPCR)和单管双引物对TaqMan探针qPCR(STDP-qPCR)的检测灵敏度,并用STDP-qPCR法定量检测了感病沙田柚花器和种子中的Las.结果显示,STDP-qPCR检测灵敏度为1*100拷贝/μL,比SGI-qPCR高100倍;花器中的雄蕊、花瓣、雌蕊和花粉等组织,以及种子的种皮和胚乳组织中均可检测到Las,但含量差异较大,其中种皮组织中Las含量最高,达到109842个细胞/μg DNA,花粉中的Las含量最低,为308个细胞/μg DNA,所有种壳中均未检测到Las;基于雄蕊组织的黄龙病分子诊断准确率达93.8%.表明Las在感病柑橘花器和种子中呈不均匀分布,基于雄蕊组织的黄龙病诊断方法可辅助用于该病害的高通量检测.娄兵海,宋雅琴,赵小龙,白先进,邓崇岭 - 植物保护学报文章来源： 万方数据 -
荧光定量PCR检测石蜡组织中结核分枝杆菌
目的 改进石蜡组织的处理,提高结核分枝杆菌在石蜡组织中检测的敏感性.方法 选择荧光定量PCR检测石蜡组织结核分枝杆菌检测结果为临界值的蜡块标本,行HE染色、抗酸染色及荧光定量PCR石蜡组织结核分枝杆菌DNA检测.通过对其石蜡组织少修片、混合多个蜡块、选择干酪样坏死及肉芽肿病变较多的蜡块以及适量增加模板量的多种方法,对比其在荧光定量PCR法中的检出率.结果 各实验组Ct值减小,扩增曲线均有不同程度的升高.结论 改进操作措施后可以提高蜡块中结核分支杆菌检测的敏感度.杨长绍,王丽,潘鑫艳,王力,黎贵芸,杨举伦 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
关于缩略语使用的要求
文中尽量少用缩略语.已被公知公认的缩略语可以不加注释直接使用.例如:DNA、RNA、HBsAg、PCR等.不常用的、尚未被公知公认的缩略语以及原词过长、在文中多次出现者,若为中文可于文中第一次出现时写出全称,在圆括号内写出缩略语;若为外文可于文中第一次出现时写出中文全称,在圆括号内写出其外文缩略语.- 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据 -
检测伪狂犬病毒gB基因荧光定量PCR方法的建立
利用DNAMAN软件对GenBank登录的伪狂犬病病毒(PRV)各毒株gB基因序列进行比对分析,选择其保守区域设计合成特异性的引物和TaqMan探针,同时利用普通PCR技术扩增获得全长的伪狂犬病毒gB基因,并克隆到pMD20-T载体上作为阳性标准品.通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了一种快速检测伪狂犬病病毒的荧光定量PCR技术.该检测技术具有较高的灵敏性、特异性和可靠性.对制备的pMD-gB阳性标准品的检测结果表明,所建立的伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR最低检测极限可达1.50*102拷贝/反应;同时相比于普通PCR方法其灵敏度高100~1 000倍以上,并且重复性好.在对60份临床样品的检测中,荧光定量PCR不仅检出了普通PCR检测为阳性的样品,且检出了2份普通PCR未检出的样品,进一步证实了该方法快速、灵敏性好,可用于PRV感染的早期快速定量检测和肉类食品进出口检疫.朱淑芬,朱瑞良,乔彩霞,高志强,张利峰,张鹤晓,吴亚琼,王慧珊 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据
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