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微小RNA传递载体聚乙二醇-b-聚赖氨酸的合成及细胞毒性研究
目的:制备微小RNA( miRNA)传递载体聚乙二醇-b-聚赖氨酸( PEG-b-PLL),并且选用模型细胞对其进行毒性考察。方法通过核磁谱测定聚赖氨酸的聚合度,用4%琼脂糖凝胶电泳检测聚复合物对miRNA的包封,用动态光散射法测定制备所得聚复合物粒径、多分散性指数(PDI),Zeta电位,用荧光标记的FAM-hsa-miR-15a进行包封率的测定,采用CKK-8试剂盒测定K562细胞(人慢性淋巴白血病细胞)活力考察PEG-b-PLL的细胞毒性。结果用PEG-b-PLL制备的聚阳离子胶束/miRNA复合物特性符合应用要求,并且细胞毒性显著低于聚乙烯亚胺( PEI ), lipo2000。结论离子聚合物载体PEG-b-PLL符合应用要求,同时毒性较低,有望成为基因转染的有效载体。任海峰,赵英魁,杨峰,俞媛,马志强 - 药学实践杂志文章来源： 万方数据 -
微小RNAs在乳腺癌中的应用价值
乳腺癌是目前女性最常见的恶性肿瘤,2012年全球共有170万乳腺癌新增病例,且乳腺癌的发病率和死亡率持续上升[1].肿瘤标志物在乳腺癌的早期诊断、个体化治疗、预后及疗效预测等方面发挥重要作用.目前常见的肿瘤标志物包括蛋白酶类、肿瘤特异性抗原、代谢产物等.然而,这些标志物特异性并不高,特别是在肿瘤早期筛查、良恶性肿瘤的区分和低度恶性肿瘤的诊断方面特异性较低[2].微小RNA(microRNA,miRNA)是一类朱安婕,袁芃 - 中华乳腺病杂志(电子版)文章来源： 万方数据 -
siRNA对预分化骨髓间充质干细胞β2M表达的影响
目的:研究小干扰RNA(siRNA)对预分化骨髓间充质干细胞(BMSCs)β2-微球蛋白(β2M)基因表达的影响。方法:BMSCs成软骨诱导液预分化21 d后,将β2 M siRNA用Lipofectamine 2000转染BMSCs、分为转染组、空白对照组和阴性对照组,应用实时定量PCR、Western blotting、激光共聚焦显微观察等方法检测siRNA对预分化BMSCs的β2 M mRNA和蛋白的表达情况,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光检测预分化BMSC的蛋白聚糖多聚体和Ⅱ型胶原分泌情况。结果:实时定量PCR、Western blotting 和激光共聚焦显微观察结果显示siRNA成功抑制β2 M mRNA和蛋白的表达,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光结果显示siRNA不影响预分化BMSCs蛋白聚糖多聚体和Ⅱ型胶原蛋白的分泌。结论: RNAi 干扰β2 M 可降低BMSCs 中β2 M mRNA和蛋白的表达,但不影响预分化BMSCs的软骨细胞特性。戴兵,范时洋,陈龙,金海东,蔡建武,潘骏 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
茎一环RT-PCR法定量miRNA-421的引物设计
本研究旨在通过茎一环RT-PCR法,建立有效定量miRNA421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-d21,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎一环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎一环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点.赵丽,杨洋,温传俊 - 南京师大学报(自然科学版)文章来源： 万方数据 -
Has-miR-339-5p对裸小鼠人乳腺癌移植瘤形成及生长的影响
目的 建立miR-339-5p的稳定转染细胞系并探讨其在小鼠体内的成瘤性.方法 用Lipofectamine 2000介导的转染法将含miR-339-5p片段的质粒转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,以空载体作为阴性对照.并用G418作为筛选用药建立稳定转染细胞系.皮下原位接种癌细胞观察其对乳腺癌的形成及生长的影响.结果 RT-PCR技术检测稳定转染细胞系miR-339-5p miRNA的表达,与阴性对照组相比,其表达明显上调;接种miR-339-5p稳定转染细胞系组小鼠形成乳腺癌的时间明显迟于阴性对照组,且肿瘤生长较慢.结论 miR-339-5p可降低体内乳腺癌细胞的生长繁殖能力,有望成为乳腺癌治疗的潜在新靶点.聂静,吴正升,朱敬凤,黄山,吴强 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
基于数据分析探索APL中内含子microRNA与PML-RARα组成的调控环路
目的:探索急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)中microRNA、PML-RAR α与下游靶基因组成的调控模式.方法:应用基于染色质的免疫沉淀( chromatin immunoprecipitation on chip,ChIP-on-chip)技术并结合数据分析方法对miRNA和PML- RARα与下游靶基因形成的调控环路进行研究.结果:在PML-RARα所调节的基因中,相当一部分同时也在转录后被PML-RARα潜在调节的miRNAs所调节,从而组成特定的调控环路.对于不同的内含子miRNAs,类型Ⅰ的调控环路模式在白血病细胞分化过程中更为普遍存在.结论:APL中microRNA与PML-RARα通过特定的调控环路调控下游靶基因的表达.涂序辉,王侃侃,张济 - 海南医学院学报文章来源： 万方数据 -
miR-122的研究进展
miR-122是一种专一表达于肝脏的miRNA,在生理状态下参与精子发生、肝细胞发育、肝细胞表型、分化代谢,以及肝细胞应急应答等基本生命活动过程.在病理状态下,miR-122有促进HCV复制和翻译的作用,还可促进肿瘤细胞的凋亡,在HCC发生、发展过程中发挥抑癌基因样作用.李绍祥,李浩然,张成平,曹建彪 - 昆明医科大学学报文章来源： 万方数据 -
肿瘤中DNA甲基化对miRNA调控作用的研究进展
miRNA的异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关,但miRNA的表达调控机制目前尚不清楚。有研究提示,在肿瘤细胞中DNA 甲基化异常会引起 miRNA 的表达改变,即DNA甲基化程度的改变将促进或抑制miRNA的表达,从而抑制或促进肿瘤的发生、发展。因此,DNA甲基化对miRNA的调控作用已成为肿瘤相关研究领域中的“新大陆”。该文就DNA甲基化调控miRNA的表达并参与人类肿瘤发生、发展的有关研究进展作一综述。顾页,林洁 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
运动心脏重塑过程中miRNA-350/JNK信号通路的动态变化
目的:通过递增负荷跑台运动建立运动性心肌肥大模型,观察miRNA-350及其靶基因在8周递增负荷运动诱导的心脏重塑中的动态变化,以探讨运动心脏重塑的可能机制.方法:96只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(C组)和递增负荷运动组(ILT组).正式训练的第7周末,用超声心动图检测各组小鼠心脏结构和功能参数;用qRT-PCR检测运动心脏重塑过程中不同时相(0d、3d、7d、15 d、29 d和57 d)miRNA-350的动态变化;分别用qRT-PCR和Western Blotting技术检测JNK mRNA和JNK蛋白的动态变化.结果:ILT组小鼠PWTS、PWTD、LVEDD、IVSTD和IVSTS等指标显著高于C组,EF无显著性差异;在运动心脏重塑过程中,ILT组小鼠心脏中miRNA-350的表达水平先快速增高再急剧下降,然后缓慢下降到与C组相当的水平;在递增负荷运动的0d、3d和7d,miRNA-350的靶基因JNK mRNA的表达水平没有显著变化,此后,JNK mRNA的表达水平呈上升趋势;在运动心脏重塑的初期,JNK蛋白的表达水平先显著下降再缓慢上升.结论:持续8周递增负荷跑台运动成功的诱导了小鼠心肌肥大;运动心脏重塑过程中miRNA-350、JNK mRNA和JNK蛋白呈动态变化,提示miRNA-350/JNK信号通路可能参与运动心脏重塑的调节.翟帅,陈佩林 - 体育科学文章来源： 万方数据 -
人Midkine基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
目的:构建人Midkine( MK)基因RNA干扰( RNA interference, RNAi)慢病毒载体并鉴定,为其体内外实验研究提供基础。方法设计针对人MK基因序列的4条RNAi靶点序列,分别与慢病毒载体进行连接,获得GV115-MK-1、GV115-MK-2、GV115-MK-3和GV115-MK-4质粒,转染感受态细菌,经PCR及测序技术的鉴定,然后与pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染293T细胞,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。4种病毒载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,用RT-PCR检测MK mRNA的表达。结果 PCR和测序检测结果证实,插入的MK RNAi核苷酸序列正确,共转染293T细胞后可见大量绿色荧光。浓缩病毒后测定其滴度分别为6×108、5×108、5×108和6×108 TU/ml。感染 MDA-MB-231细胞后, RT-PCR 检测结果表明, GV115-MK-1干扰效果明显,MK基因敲减效率达87.2%( P<0.05)。结论成功构建人MK RNAi慢病毒表达载体,并可有效抑制MDA-MB-231细胞MK基因的表达。王庆苓,张鹏 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据
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