科创中国

目的:利用5型腺病毒载体转染人T淋巴细胞,对其转染T淋巴细胞的效率以及细胞毒性进行分析.方法:选取T淋巴瘤Jurkat细胞及原代T细胞,腺病毒按感染复数(multiplicity of infection,MOI)为20、50、100、200和400对其转染,转染48 h后利用流式细胞术检测转染效率;选取腺病毒转染后的不同时点,利用碘化丙啶染色法分析转染对于细胞周期的影响;利用Annexin V/7-AAD染色法分析转染诱导细胞凋亡情况;利用台盼蓝染色计数法分析转染对活细胞数目的影响.结果:5型腺病毒载体转染T淋巴瘤的效率最高,转染效率随着MOI值的增大而增加;CD8+T细胞和CD4+T细胞的转染效率大致相同,T细胞经刺激活化后,CD8+T细胞的转染效率下降;病毒转染未导致明显细胞凋亡;病毒转染对细胞周期与活细胞数目没有显著影响.结论:5型腺病毒载体转染T细胞呈现较低细胞毒性.

目的:对积雪草的免疫抑制活性成分进行分离、纯化及鉴定,并观察其对小鼠脾淋巴细胞增殖和凋亡的影响,探讨其免疫调节机制。方法:利用半制备型液相色谱对积雪草提取物进一步分离和纯化。运用流式细胞术观察积雪草活性成分对脾淋巴细胞凋亡和线粒体膜电位的影响。利用紫外光谱、电喷雾电离负离子模式质谱、[1 H ]核磁共振( NMR)、[13 C] NMR等数据鉴定所得活性成分结构。结果:(1)所得积雪草活性成分化合物Ⅰ、Ⅱ的分子量分别为302和286。(2)积雪草中化合物Ⅰ、Ⅱ能显著抑制小鼠脾淋巴细胞增殖。(3)积雪草中化合物Ⅰ、Ⅱ能促进小鼠脾淋巴细胞凋亡,降低线粒体膜电位。(4)[1H] NMR和[13C] NMR鉴定化合物Ⅰ、Ⅱ分别为槲皮素和山奈酚。结论:从积雪草中提取获得的黄酮化合物Ⅰ、Ⅱ分别为槲皮素及山奈酚,具有抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的效应,其作用途径可能是促进脾淋巴细胞凋亡并降低线粒体膜电位。

目的:探讨酵母多糖致伤小鼠脓毒症病程发展过程中脾脏耐受性树突状细胞( dendritic cell, DC)的形成对脾脏T淋巴细胞免疫活性的影响,并通过程序性死亡受体-1(programmed death-1,PD-L1)抗体阻断PD-L1/PD-1途径改善耐受性DC对T淋巴细胞活性的抑制作用。方法采用酵母多糖腹腔注射的方法复制小鼠脓毒症模型。用磁珠法分离致伤小鼠脾脏DC和T淋巴细胞,测定脾脏组织中DC上PD-1、PD-L1、PIR-B的表达水平和分泌IL-12、IL-10的能力;检测脾脏T淋巴细胞增殖活性和IL-2的分泌水平。进一步将致伤组小鼠脾脏DC与正常小鼠脾脏T淋巴细胞混合培养,并加入PD-L1抗体,检测T淋巴细胞增殖活性及混合培养上清中IL-2、IL-12和IL-10含量。结果酵母多糖致伤后5天和12天组小鼠脾脏DC上PD-1、PD-L1及PIR-B的表达大幅上调,IL-12p70分泌减少,IL-12p40和IL-10分泌增加;脾脏T淋巴细胞增殖活性降低、IL-2分泌减少。在致伤组DC与正常T淋巴细胞混合培养体系中加入PD-L1抗体可减轻致伤组DC对T淋巴细胞增殖活性和分泌IL-2的抑制作用,并改善DC上IL-12p70、IL-12p40和IL-10的分泌能力。结论酵母多糖诱导小鼠脓毒症的病程晚期,脾脏耐受性DC的形成导致T淋巴细胞活性降低;PD-L1抗体通过干预PD-1/PD-L1途径改善T淋巴细胞和DC的免疫活性。

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是普遍存在于生物体中的一种序列特异性的基因表达调控方式,它是由小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)介导的特异性降解mRNA的过程[1].T淋巴细胞是处于非分裂期的细胞,在移植物抗宿主病等疾病中起到重要作用,是基因治疗中常用的靶细胞.但在RNAi技术中,T淋巴细胞基因转导效率低而影

目的:分析雪胆素乙(CuIIb)对刀豆蛋白 A(Con A)刺激的小鼠淋巴细胞体外凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:以Annexin V染色结合流式细胞术分析小鼠淋巴细胞凋亡情况;利用JC-1染色分析淋巴细胞线粒体膜电位变化;Western blotting检测凋亡相关蛋白变化.结果:CuIIb处理后,早期和中期凋亡细胞比例明显增加,淋巴细胞线粒体膜电位降低.同时,CuIIb以剂量依赖方式激活caspase-3凋亡通路并明显降低抗凋亡蛋白survivin的表达.结论:CuIIb诱导淋巴细胞凋亡,其机制可能与其降低线粒体膜电位、激活caspase-3凋亡通路有关.

结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤(NLPHL)与经典型霍奇金淋巴瘤(CHL)虽有相似之处,但其流行病学、临床、病理及预后特征不同,故被独立进行分类.二者鉴别:在25%~70%的CHL瘤细胞中可检测到EBV,而在大多数NLPHL则不然.目前仅在亚洲及拉丁美洲的一些文献中报道了少数EBV+NLPHL病例,在北美地区尚无EBV+NLPHL发病率的大宗病例报道.故作者选取北美3个中心机构的302例NLPHL,包括145个儿童病例(≤18岁)及157个成人

目的:观察骨髓间充质干细胞(BM MSCs)对体外活化T细胞的免疫调节作用.方法:提取Wistar大鼠BM MSCs及新鲜脾淋巴细胞做共培养.实验分3组,3个时间点:分别为0、24、48 h脾淋巴细胞/BM MSCs+刀豆蛋白A(ConA)(实验组),脾淋巴细胞+ConA(对照组),单纯淋巴细胞组(空白组).MTT检测T淋巴细胞活性,ELISA检测细胞因子TNF-α、IL-10及TGF-β水平,流式检测Foxp3+调节性T细胞表达率.结果:(1)与对照组相比,实验组24、48 h在2个时间点T淋巴细胞活性均显著降低(P<0.05);(2)与对照组相比,实验组TNF-α在2个时间点有显著降低(P<0.05),实验组IL-10、TGF-β表达水平有显著升高(P<0.05);(3)实验组Foxp3+T调节细胞表达率高于对照组;(4)随着时间延长,空白组及对照组T淋巴细胞活性均显著降低(P<0.05),实验组T淋巴细胞活性随时间延长差异无统计学意义.结论:BM MSCs可以抑制T淋巴细胞活化,并通过减少炎症因子TNF-α的释放抑制免疫应答.另外,BM MSCs可通过自分泌及诱导T调节细胞产生并分泌免疫抑制因子IL-10、TGF-β下调免疫反应,产生免疫耐受.

目的:研究结核分枝杆菌抗原85B(Ag85B)慢病毒对正常人支气管上皮细胞(NHBEC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受体TSLPR的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的机制.方法:将Ag85B基因重组质粒转入293T细胞,构建携带Ag85B和EGFP报告基因的慢病毒载体p LVXIRES-Neo-EGFP-Ag85B(Ag85B慢病毒).用鉴定后的Ag85B慢病毒感染HEK293细胞,计算滴度并观察感染效率.利用Lipofectamine? 2000使Ag85B慢病毒感染体外培养NHBEC,设立空病毒感染和空白对照组.Real-time PCR和Western blotting检测Ag85B、TSLP和TSLPR mRNA和蛋白表达水平.结果:成功构建Ag85B慢病毒感染NHBEC体系,Ag85B慢病毒感染NHBEC 48 h后,荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,细胞生长状态良好,病毒滴度为2*1011TU/L,感染效率达到90%以上.Real-time PCR和Western blotting结果显示Ag85B慢病毒成功感染NHBEC,可见相应Ag85B mRNA和蛋白表达.与空病毒感染和空白对照组比较,Ag85B慢病毒感染组TSLP mRNA表达有下降趋势,TSLPR mRNA与TSLP和TSLPR的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).结论:Ag85B慢病毒感染NHBEC可以抑制NHBEC的TSLP和TSLPR的表达,提示Ag85B可能通过靶向阻滞TSLP-TSLPR途径抑制哮喘气道炎症.

目的 探讨外周血淋巴细胞计数、淋巴细胞比例在非感染性全身炎症反应综合征(SIRS)、脓毒症及严重脓毒症患者中的变化及意义.方法 回顾分析201 1年1月至2013年9月入住北京大学第三医院急诊科重症监护病房(ICU)423例患者的临床资料,其中非感染性SIRS患者54例,脓毒症患者177例,严重脓毒症患者192例;死亡150例,存活273例.入院时检测外周血白细胞计数(WBC)、中性粒细胞比例(N)、淋巴细胞计数、淋巴细胞比例、乳酸、血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)和降钙素原(PCT)水平,并计算急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分.根据患者诊断和预后分组,比较各指标,并采用Spearman相关分析评价淋巴细胞与各指标的相关性.结果 年龄越大,病情越重.在SIRS组、脓毒症组及严重脓毒症组,随病情加重,APACHEⅡ评分(分:7.78±3.72、13.85±7.22、24.00±9.79)、住院时间[d:6.0(1.0,9.0)、12.0(8.0,22.0)、19.5(7.0,29.0)]、病死率(0、10.2%、52.6%)、WBC(×109/L:7.59±3.27、8.94±3.95、10.32±5.50)、N(0.685±0.132、0.778±0.135、0.831±0.086)、hs-CRP[mg/L:4.60(2.80,7.52)、23.58(13.49,49.22)、59.77(19.36,110.62)和PCT[μg/L:0.05(0.05,0.05)、0.09(0.05,0.61)、0.63(0.10,5.25)]呈升高趋势(均P=0.000),淋巴细胞计数[×109/L:1.53 (0.89,1.88)、0.90 (0.65,1.42)、0.80 (0.50,1.12)]、淋巴细胞比例(0.225±0.122、0.138±0.097、0.106±0.070)呈降低趋势(P<0.05和P<0.01);3组乳酸水平比较差异有统计学意义[分别为2.40(1.30,5.10)、1.10(0.80,2.00)、1.40(1.00,2.50)mmol/L,P=0.000].与存活组比较,死亡组年龄(岁:76.71±12.21比73.21±14.49)、APACHEⅡ评分(分:24.69±9.58比13.91±8.41)、住院时间[d:12.0(4.0,28.0)比11.0(8.0,22.0)]、WBC(×109/L:10.29±5.82比8.89±3.98)、N(0.809±0.130比0.776±0.120)、乳酸[mmol/L:1.80(1.10,2.90)比1.30(0.90,2.49)]、hs-CRP[mg/L:50.94(19.21,97.13)比21.71 (6.39,54.40)和PCT[μg/L:0.74 (0.13,5.83)比0.08(0.05,0.59)]明显升高(P<0.05或P<0.01),淋巴细胞计数[×109/L:0.90(0.50,1.29)比1.05 (0.70,1.54)]、淋巴细胞比例(0.123±0.098比0.143±0.097)明显降低((P<0.01和P<0.05).淋巴细胞计数与N(r=-0.597,P=0.000)、hs-CRP(r=-0.298,P=0.000)、PCT(r=-0.304,P=0.000)和APACHEⅡ评分(r=-0.214,P=0.000)呈明显负相关,与淋巴细胞比例呈明显正相关(r=0.691,P=0.000),与WBC(r=0.082,P=0.0910),乳酸(r=0.073,P=0.132)无相关性.结论 淋巴细胞水平与脓毒症的严重程度相关,监测其水平变化可作为脓毒症患者病情评估及治疗效果的辅助指标之一.

自身免疫性肝病的发病机制目前仍不清楚,这严重地影响了临床的诊治水平.人类滤泡辅助性T细胞(TFH)能够高表达趋化因子受体CXCR5及CD4分子,具有辅助B细胞分化为浆细胞进而产生抗体的功能.研究显示,该细胞与自身免疫疾病及传染病的发生和转归密切相关,本文针对TFH细胞及其与自身免疫性肝病及病毒性肝炎的关系进行综述.一、滤泡辅助性T(Tfh)细胞命名、表面标记及其分化和发育(一)细胞命名人类认识滤泡辅助CD4T细胞(Tfh)是在