科创中国

目的 探讨氢化可的松琥珀酸钠对感染性休克患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)的影响.方法 采用回顾性研究方法,以中国医学科学院北京协和医院急诊科2013年1月至3月期间收治的35例成年感染性休克患者为研究对象.根据是否使用氢化可的松琥珀酸钠(200 mg/d)治疗将患者分为激素治疗组(19例)及非激素治疗组(16例).于治疗前及治疗24 h、48 h,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清TNF-α、IL-10水平.结果 与治疗前比较,非激素治疗组血清TNF-α于48 h明显降低(ng/L:165.67±105.45比224.56±142.23,P<0.05),而IL-10无明显变化(ng/L:15.05±1.56比14.38±1.64,P>0.05);激素治疗组治疗后24 h血清TNF-α水平即明显降低(ng/L:172.07±153.50比231.89±139.10,P<0.05),IL-10明显升高(ng/L:14.80±1.61比14.60±1.48,P<0.05),并且改善程度明显优于非激素治疗组[TNF-α(ng/L):172.07±153.50比223.46±154.90,IL-10(ng/L):14.80±1.61比14.72±1.78,均P< 0.05].结论 氢化可的松琥珀酸钠通过抑制免疫反应使血清TNF-α降低、IL-10升高,从而减轻炎症反应,对感染性休克患者有显著的辅助治疗作用.

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)对创伤弧菌脓毒症肺损伤的保护作用及机制.方法采用全骨髓贴壁培养法分离小鼠BMSC.按照随机数字表法将雄性ICR小鼠分为生理盐水对照组(NS组)、生理盐水+BMSC对照组(NSB组)、创伤弧菌脓毒症组(VV组)、创伤弧菌脓毒症+BMSC治疗组(VVB组),每组40只.于小鼠左侧腹腔注射1×107 cfu/mL创伤弧菌悬液5 mL/kg制备脓毒症模型;于制模后经尾静脉注射4×105 cfu/mL BMSC 5 mL/kg进行干预.各组分别于染菌后6、12、24、48 h取10只小鼠的肺组织,计算肺湿/干质量(W/D)比值;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞核内核转录因子-κBp65(NF-κBp65)表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β、IL-6)水平;苏木素-伊红(HE)染色及醋酸铀-枸橼酸铅双染后于镜下观察肺组织病理学改变.结果 VV组染毒后各时间点肺W/D比值、肺组织细胞核内NF-κBp65表达量及肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6表达均较NS组明显升高,且于12 h达峰值;VVB组肺W/D比值、NF-κBp65表达量及TNF-α、IL-1β、IL-6水平均明显低于VV组同时间点〔12 h VV组比NS组:肺W/D比值7.22±0.03比5.21±0.02,NF-κBp65表达量(灰度值)1.86±0.74比0.75±0.07,TNF-α(ng/L)433.24±3.23比106.57±1.21,IL-1β(ng/L)35.64±0.15比10.64±0.48,IL-6(ng/L)58.84±0.55比17.69±1.35,均P<0.05;12 h VVB组比VV组:肺W/D比值6.49±0.06比7.22±0.03, NF-κBp65表达量(A值)1.16±0.08比1.86±0.74,TNF-α(ng/L)357.22±3.25比433.24±3.23,IL-1β(ng/L)27.77±0.59比35.64±0.15,IL-6(ng/L)38.68±1.29比58.84±0.55,均P<0.05〕.NS组和NSB组各指标比较差异均无统计学意义.光镜下显示NS组和NSB组肺组织病理改变不明显;VV组肺组织充血、水肿,肺泡腔内可见水肿液、红细胞,炎性细胞浸润;VVB

目的:研究沉默信息调节因子1(SIRTl)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞NF-KBv6s蛋白乙酰化影响及其保护作用.方法:培养大鼠肾小球系膜细胞,实验分为5组:正常对照组、甘露醇组、高糖组、白藜芦醇组和SIRTlRNAi组.MTT比色法检测细胞活性;以实时荧光定量PCR检测SIRT1、单核细胞趋化蛋白1(MCP.1)、血管黏附分子1(VCAM-1)、肿瘤坏死因子a(TNF-a)和转化生长因子9,(TGF-B1)mRNA水平;Westernblotting检测SIRTI和NF-KBp65乙酰化蛋白的表达水平,ELISA检测MCP.1、VCAM.1、TNF.仪、TGF.B1和丙二醛(MDA)的含量.结果:高糖刺激使肾小球系膜细胞的活力降低,超氧化物岐化酶(SOD)活性降低,MDA含量增加;SIRTlmR.NA及蛋白表达降低,NF-KBp65蛋白乙酰化水平增高,MCP-1、VCAM-1、TNF-a、TGF.B,mRNA和蛋白水平增高.白藜芦醇可逆转高糖引起的变化,而沉默SIRTI基因使高糖诱导的系膜细胞NF-KBp56乙酰化水平、MCP-1、VCAM-1、TNF-a、TGF-B1mRNA和蛋白水平升高.结论:高糖可降低SIRTl水平,增加炎症因子的表达.SIRTl的激活可使NF-KB的亚单位RelA/p65去乙酰化,从而抑制炎症因子的产生.SIRT1可作为治疗DN的潜在靶点.

目的 探讨肿瘤坏死因子-α诱导蛋白6(TSG-6)对百草枯中毒大鼠急性肾损伤(AKI)的作用.方法 24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组和TSG-6干预组,每组8只.腹腔注射等体积稀释的百草枯溶液50 mg/kg染毒制备百草枯中毒模型;假手术组则给予无菌生理盐水2 mg/kg; TSG-6干预组染毒后1h腹腔注射30 μg重组人TSG-6.各组于染毒6h后取血评估肾功能,活杀取肾组织进行病理学评估并计算AKI评分,采用实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织促炎症细胞因子白细胞介素(IL-1β、IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TN F-α)的基因表达.结果 与假手术组比较,模型组血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平及AKI评分均明显升高[BUN(mmol/L):22.64±2.36比7.09±0.65,t=6.986,P=0.000; Cr(μmol/L):177.28±18.67比60.32±3.11,t=7.134,P=0.000;AKI评分(分):9.14±0.28比0.30±0.23,t=9.013,P=0.000],肾组织IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达明显升高(IL-1β mRNA:3.23±0.28比1.00±0.07,t=5.874,P=0.000; IL-6 mRNA:4.16±0.37比1.00±0.08,t=7.125,P=0.000; TNF-α mRNA:3.85±0.31比1.00±0.10,t=6.342,P=0.000).TSG-6干预组血清BUN、Cr、AKI评分及肾组织IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达均明显低于模型组[BUN(mmol/L):14.07±5.23比22.64±2.36,t=2.533,P=0.026; Cr(μmol/L):112.76±14.81比177.28±18.67,t=2.778,P=0.016;AKI评分(分):5.35±0.19比9.14±0.28,t=2.885,P=0.013;IL-1β mRNA:2.26±0.19比3.23±0.28,t=2.457,P=0.023; IL-6 mRNA:2.92±0.29比4.16±0.37,t=2.975,P=0.011;TNF-α mRNA:2.58±0.23比3.85±0.31,t=2.564,P=0.019].结论 TSG-6干预可通过抑制炎症反应减轻百草枯中毒大鼠的AKI.

目的:观察别嘌呤醇与厄贝沙坦联用对慢性肾脏疾病(CKD)患者的血尿酸、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血管性血友病因子(vWF)、心脏结构与功能的影响.方法:将CKD合并高尿酸血症患者48例分成A、B组,各24例.A组接受厄贝沙坦治疗,B组接受厄贝沙坦加别嘌呤醇治疗.入组第2天及别嘌呤醇治疗满12个月后清晨空腹抽血检测血尿酸、hs-CRP和vWF水平,行心脏超声检查.结果:治疗后,A、B组血尿酸、hs-CRP、vWF水平均较治疗前有显著下降(P

目的:观察Toll样受体2/核转录因子-κB(TLR2/NF-κB)信号通路预处理在呼吸机相关性肺损伤(VILI)中的作用。方法将30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组,每组10只。A组:经气管导管缓慢滴入10μg/kg TLR2单克隆抗体(TLR2-mAb)200μL干预后,40 mL/kg潮气量(VT)行机械通气;B组:8 mL/kg VT行机械通气;C组:滴入10μg/kg无生物学活性的TLR2-mAb作为同型抗体干预后,40 mL/kg VT行机械通气。于通气4h计算肺湿/干质量(W/D)比值,镜下观察肺组织病理学及细胞超微结构改变;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL-1β、IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织TLR2、NF-κB及髓样分化因子88(MyD88)的mRNA表达。结果显微镜下观察显示:A、B组肺组织无明显病理学改变,肺泡巨噬细胞、Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞超微结构无明显损伤;C组可见明显肺泡腔融合,肺间隔增宽,大量炎性细胞聚集,肺泡巨噬细胞、Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞胞膜破坏,胞质大量空泡化,细胞器破坏严重,细胞核固缩,核周隙明显增宽。A、B组肺W/D比值以及血清和BALF中炎症细胞因子水平均较C组明显降低〔肺W/D比值:1.151±0.026、1.128±0.048比1.403±0.062;血清IL-1β(ng/L):37.05±5.61、34.52±4.31比51.45±8.18,IL-6(ng/L):53.65±5.16、55.77±5.62比89.96±7.08,TNF-α(ng/L):71.93±13.29、67.36±11.42比96.20±11.60;BALF中 IL-1β(ng/L):56.48±6.16、54.44±7.26比99.77±8.41,IL-6(ng/L):172.44±21.26、163.47±18.70比216.22±23.90,TNF-α(ng/L):235.81±42.75、231.72±40.38比374.85±69.61,均P<0.01〕,而A组与B组上述指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。A、B组肺组织TLR2、MyD88和NF-κB的mRNA表达均明显低于C组〔TLR2 mRNA(2-ΔΔCt):1.021±0.287、0.938±0.196比3.862±0.871,MyD88 mRNA(2-ΔΔCt):1.235±0.277、1.300±0.306比3.618±1.107,NF-κB mRNA(2-ΔΔCt):0.519±0.036、1.043±0.170比20.280±9.466,P<0.05或P<0.01〕,而A组与B组上述因子基因表达差异均无计学意义(均P>0.05)。结论 TLR2-mAb预处理通过阻断TLR2/NF-κB信号通路可减轻VILI模型大鼠炎症细胞因子的释放,在一定程度上减轻VILI。

目的 观察转染微小RNR-146a(miR-146a)对肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK-1)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)表达的影响,为探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控机制奠定基础.方法 将体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383分为miR-146a模拟物(mimic)组和阴性对照组,分别加入50 nmol/L Pre-miR miR-146a前体和Cy3标记的Pre-miR阴性对照进行转染,转染24 h后收集细胞,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-146a、IRAK-1 mRNA、TRAF-6mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中IRAK-1和TRAF-6的蛋白表达.结果 miR-146amimic组miR-146a表达较阴性对照组上调了(24.55±6.14)倍(t=-6.643,P=0.003).细胞中IRAK-1和TRAF-6的mRNA表达分别为阴性对照组的(1.16±0.10)倍(t=2.701,P=0.054)和(1.19±0.16)倍(t=2.032,P=0.112).而IRAK-1和TRAF-6的蛋白表达分别为阴性对照组的73.0%(t=-9.353,P=0.001)和64.1%(t=-6.839,P=0.002).结论 miR-146a mimic能成功转染肺泡巨噬细胞NR8383; miR-146a过表达后,能有效下调肺泡巨噬细胞中IRAK-1和TRAF-6的表达,其机制可能是在蛋白翻译水平的抑制.

目的 观察脉搏指示连续心排血量(PiCCO)监测指导下的高容量血液滤过(HVHF)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)治疗的影响.方法 采用前瞻性随机对照研究方法,选择2011年2月至2014年1月南通大学医学院附属泰州市人民医院收治的163例ARDS患者,按照随机数字表法将患者分为常规治疗组(50例)、HVHF组(55例)、PiCCO+HVHF组(58例).常规治疗组按ARDS治疗指南给予机械通气及药物治疗.HVHF组在常规治疗基础上分别于1、3、5、7d加用HVHF,每次持续18h.PiCCO+HVHF组在HVHF组基础上辅以PiCCO监测指导液体管理.各组患者分别于入重症监护病房(ICU)时(治疗前)及治疗4d、7d记录肺功能及PiCCO监测指标,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)浓度,并记录患者预后指标.结果 3组患者随着治疗时间的延长,氧合指数(PaO2/FiO2)、肺静态顺应性(Cs)逐渐升高,呼吸频率(RR)、乳酸(Lac)逐渐下降;HVHF组和PiCCO+ HVHF组各指标均较常规治疗组明显改善,且PiCCO+ HVHF组各指标较HVHF组升高或降低明显,以治疗7d时更为显著[PaO2/FiO2(mmHg,1 mmHg=0.133 kPa):189.3±36.8比166.3 ±36.1,Cs (mL/cmH2O):76.7±18.9比67.0±18.2,RR(次/min):16.4±5.2比19.2±5.4,Lac(mmol/L):1.20±0.41比1.41±0.43,均P<0.01].PiCCO+ HVHF组治疗后心排血指数(CI)逐渐升高,血管外肺水指数(EVLWI)、胸腔内血容量指数(ITBVI)逐渐降低,治疗4d、7d各指标与治疗前比较差异均有统计学意义[CI(L·min-1·m-2):4.62±1.13、4.83±1.10比4.01±1.02,EVLWI(mL/kg):7.6±2.7、6.5±2.6比12.4±2.9,ITBVI(mL/m2):801.3±120.9、785.4±118.7比980.1±168.6,均P<0.01].3组患者治疗后TNF-α、IL-1β均逐渐降低;HVHF组和PiCCO+ HVHF组治疗4d、7d时TNF-α、IL-1β明显低于常规治疗组,且以7d时更为显著[TNF-α(ng/L):68.35±12.63、67.54±12.90比85.35±13.70,IL-1β(ng/L):424.6±142.9、412.2±140.2比895.2±187.7,均P<0.01],而PiCCO+ HVHF组与同期HVHF组比较,TNF-α和IL-1β虽有降低,但差异无统计学意义.HVHF组和PiCCO+ HVHF组衰竭器官数、机械通气时间、ICU住院时间、住院病死率均较常规治疗组降低,且PiCCO+ HVHF组较HVHF组降低更为明显[衰竭器官数(个):2.41±0.79比2.72±0.80,机械通气时间(d):4.8±2.0比5.7±2.1,ICU住院时间(d):11.5±3.4比13.1±3.6,住院病死率:31.0%(18/58)比41.8%(23/55),均P< 0.05].结论 HVHF能降低ARDS患者炎症因子水平.PiCCO监测指导下的HVHF可以改善患者的氧合及肺顺应性,减少器官衰竭,缩短机械通气时间和ICU住院时间,降低住院病死率.

目的 观察严重增生型糖尿病视网膜病变(PDR)患者玻璃体腔注射雷珠单抗后玻璃体细胞因子的变化.方法 临床检查确诊的严重PDR患者80例80只眼纳入研究.依照非主动随机方法将患眼分为单纯玻璃体切割手术组(A组)、玻璃体腔注射雷珠单抗联合玻璃体切割手术组(B组),均为40只眼.两组间性别(x2 =0.05)、年龄(t=0.59)、糖尿病病程(t=0.36)、HbA1c(t=0.13)比较,差异无统计学意义(P>0.05).A组平均眼压,B组注药前、玻璃体切割手术前平均眼压比较,差异无统计学意义(F=0.81,P>0.05).A组患眼行玻璃体切割手术时抽取玻璃体液0.4ml.B组患眼玻璃体腔注射雷珠单抗0.05 ml(含雷珠单抗0.5 mg);注药后7d行玻璃体切割手术,抽取玻璃体液0.4 ml.双抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定玻璃体血管内皮生长因子(VEGF)、白介素(IL)-6、IL-8、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、结缔组织生长因子(CTGF)浓度.结果 玻璃体VEGF、ICAM-1浓度B组分别为(10.70±3.60)、(224.64±90.32) pg/L,A组分别为(72.38±23.59)、(665.61±203.34) pg/L.两组玻璃体VEGF、ICAM-1浓度比较,差异有统计学意义(t=16.34、12.53,P<0.001);玻璃体IL-6、IL-8浓度B组分为(210.64±80.27)、(156.00±57.74) pg/L,A组分别为(45.78±33.82)、(41.07±13.82)pg/L.两组玻璃体IL-6、IL-8浓度比较,差异有统计学意义(t=11.97、12.24,P<0.001).A、B组玻璃体CTGF浓度比较,差异无统计学意义(t=1.39,P>0.05).B组CTGF/VEGF较A组升高,差异有统计学意义(t=14.75,P<0.001).结论玻璃体腔注射雷珠单抗1周后VEGF、ICAM-1明显下降;IL-6、IL-8明显升高;CTGF浓度无明显变化,但CTGF/VEGF明显升高.