-
耐力运动对营养性肥胖小鼠骨骼肌细胞自噬及线粒体自噬的影响
目的:探讨耐力运动对营养性肥胖小鼠骨骼肌细胞自噬及线粒体自噬的影响及其分子机制。方法:采用6周高脂膳食干预诱导生长期IC R雄性小鼠营养性肥胖模型,建模成功后随机分为高脂膳食对照组(HC ,6只)、普通膳食干预组(HN ,6只)及普通膳食联合耐力运动干预组(HNE ,6只),另选造模对照ICR小鼠为普通膳食对照组(NC ,6只),HC组小鼠持续喂养6周高脂膳食,NC、HN、HNE饲以普通膳食,HNE组小鼠进行6周跑台耐力训练,速度按周递增即15 m/min、22 m/min、27 m/min、31 m/min、35 m/min、35 m/min ,40 min/次,6次/周。末次训练24 h后处死小鼠并采样,应用JC‐1探针法检测线粒体膜电位,RT‐PCR及Western Blotting 技术检测相关基因及蛋白表达情况。结果:1)6周高脂膳食可诱导小鼠体重、LEE’s指数及附睾脂肪百分比显著增加(P<0.05),BG、TG、TC、HDL‐C、LDL‐C含量显著增加( P<0.05);2)与 HC比,HNE组骨骼肌 M HCⅠ、Ⅱa、Ⅱc表达均显著增加( P<0.05), HN、HNE组M HCⅡb mRNA表达均下调;3)与 NC比,HC组骨骼肌线粒体膜电位显著降低( P<0.05),HC、HN、HNE组小鼠骨骼肌mtDNA拷贝数量下降( P<0.05);4)与 NC组比, HC组小鼠细胞自噬相关信号分子 ATG 13、LC3 mRNA 表达下调,P62 mRNA 表达上调;HN、HNE组BECN1、ATG 13及LC3 mRNA含量显著增加(P<0.05),HC组LC3Ⅱ/Ⅰ比值下降,HN、HNE组小鼠骨骼肌 p62蛋白水平下降,HNE组 LC3Ⅱ/Ⅰ比值上调;5) HC 组 NIX mRNA表达与 NC组比下调,而在 HN、HNE组含量增加;HNE组 PARK2、PARL mRNA 较HN组上调;HC组 PINK1蛋白含量有所下调,而在 HN及 HNE组普遍上调( P<0.05)。结论:1)长期高脂膳食干预可诱导营养性肥胖发生,引起机体代谢紊乱、骨骼肌线粒体功能异常;2)耐力运动结合膳食改善可有效控制营养性肥胖小鼠体重并促进肌球蛋白的表达;3)耐力运动结合膳食改善可缓解营养性肥胖机体细胞自噬水平的下降,而对线粒体自噬的影响主要通过作用于 PINK1/Parkin信号以调控骨骼肌线粒体的数量和功能。崔迪,邱守涛,王海燕,贺杰,漆正堂,孙易,丁树哲 - 体育科学文章来源： 万方数据 -
雷帕霉素减缓大鼠被动 Heymann 肾炎的进展
目的:观察雷帕霉素对大鼠被动Heymann肾炎( PHN)的影响,并探讨自噬在其中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为3组,即对照组、PHN模型组和雷帕霉素治疗组。以造模后第21天为观察结点,采用全自动生化分析仪测定24 h尿蛋白总量、血尿素氮和血清肌酐,过碘酸-六次甲基四胺银染色观察肾脏病变,Weibel-Go-mez点计数方法计数足细胞数量,免疫荧光染色检测肾小球内C5b-9的沉积,免疫组化染色观察caspase-3的表达, Western blotting检测肾小球LC3的表达。结果:雷帕霉素明显减轻PHN模型大鼠的蛋白尿排出(P<0.05),同时各组大鼠的肾功能均正常,其间无显著差异;雷帕霉素使PHN大鼠肾小球基底膜增厚的程度和范围有所减轻;雷帕霉素明显改善PHN大鼠足细胞缺失情况,减少足细胞凋亡;雷帕霉素可增强肾小球内固有细胞的自噬水平。结论:在PHN的病变过程中,适度增强自噬减少足细胞凋亡,减轻肾脏病变和缓解蛋白尿,可能是雷帕霉素减缓大鼠PHN进展的重要机制之一。杨凤杰,周建华,吕倩影,蒲金赟,张瑜 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
脂多糖通过PI3彰Akt/mToR通路调控巨噬细胞自噬
目的:观察脂多糖对巨噬细胞自噬活化的影响及相关信号通路的探讨.方法:体外培养巨噬细胞株RAW264.7,分为对照组、饥饿状态激活自噬组、单纯脂多糖(LPS)刺激组、LPS+P13K抑制剂(hVps34)组和LPS+roTOR抑制剂(雷帕霉素)组.构建荧光真核表达载体pcDNA3.1.GFP-LC3,转染巨噬细胞,通过荧光显微镜观察各组细胞中自噬体形成情况.qRT.PCR方法检测各组中与细胞自噬相关的Atg5、Atg7、LC3一II和Bnip3mRNA表达水平的改变.利用Westernblotting检测LC3-II、P-Akt和p-roTOR蛋白在各组中的表达情况,以评价LPS激活巨噬细胞自噬的分子通路.结果:成功构建稳定表达GFP.LC3的巨噬细胞,在荧光显微镜下可以观察到自噬在饥饿状态组、LPS+hVps34组和U玛+雷帕霉素组均有明显增强;qRT-PCR检测到Atg5、LC3-II和Bnip3mRNA的表达在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组均有明显增强,而在LPS组中略微下降;Westernblotting检测发现p-Akt在饥饿状态组、LPS组和LPS+雷帕霉素组中表达明显升高;p-mTOR在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组表达明显下降;LC3-II的表达在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组中表达要高于对照组和LPS组.结论:LPS参与巨噬细胞自噬的调控,其可能的信号通路为P13K/Akt/mTOR通路,但仍存在其它有效的调控通路.杜涛,黄海,陈欣,丁红,张睿,刘梅兰,陈慧 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
运动训练通过诱导自噬、抑制凋亡改善老龄大鼠心脏功能
目的:观察梯度运动对老龄大鼠心肌细胞自噬及凋亡的影响,探讨运动训练提高老龄大鼠心脏功能的机制.方法:实验分为3组,青年组(young)、老年组(old)和老年运动组(old+Ex).超声心动图记录大鼠心脏功能,透射电镜观察心肌细胞超微结构变化、自噬体的形成以及线粒体形态学的改变,Western blotting检测心肌组织自噬相关蛋白5(Atg5)、自噬相关蛋白Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及心肌线粒体细胞色素C(CytC)蛋白的表达,TUNEL方法检测心肌细胞凋亡,分光光度法检测钙诱导的线粒体通透性转换孔(mPTP)开放.结果:(1)与young组比较,透射电镜下可见old组大鼠心肌肌原纤维排列不整齐,线粒体基质疏松,线粒体膜有破裂,肌丝间有大量脂褐素颗粒沉积;心肌组织中Beclin 1与Atg5蛋白表达降低,LC3Ⅱ/Ⅰ比值降低,线粒体Cyt C表达下降,细胞凋亡指数增加,mPTP开放数目增加,左心室收缩末期与舒张末期直径明显增大,左心室射血分数与缩短分数降低(P<0.05或P<0.01).(2)与old组比较,old+Ex组大鼠心肌超微结构观察可见肌节结构清晰,线粒体基质致密,数目增多,自噬体形成增多,脂褐素颗粒沉积明显减少;并且心肌组织Beclin 1与Atg5蛋白表达增加,LC3 Ⅰ向LC3 Ⅱ转换增加,细胞凋亡指数减少,mPTP开放数目减少,心肌线粒体CytC表达上调,左室功能有明显改善(P<0.05或P<0.01).结论:运动训练通过上调老龄大鼠心肌细胞自噬,抑制细胞凋亡,改善老龄大鼠心脏功能.张昊,王伟伟,薛过,张伟华,王丽娜,林岩,姜晓姝,田野,徐长庆 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
雷帕霉素对顺铂作用下人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、侵袭、黏附及自噬凋亡的影响
目的:研究雷帕霉素( Rap)对顺铂( DDP)作用下人肺腺癌A549及耐药A549/DDP 细胞增殖、迁移、黏附及其自噬凋亡的影响。方法:培养人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞株,利用MTT方法分别检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞增殖抑制率的影响;Transwell方法检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞体外侵袭能力的影响;黏附实验检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞体外侵袭能力的影响;流式细胞术检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞凋亡的影响;Western blotting检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞自噬标志蛋白beclin-1和LC3表达的影响。结果:与Rap或DDP单独作用组相比,Rap和DDP联合作用能够同时显著抑制人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、体外侵袭能力及细胞黏附能力,并能够促进细胞凋亡和自噬标志蛋白beclin-1和LC3的表达(均P<0.05)。结论:Rap能够通过促进细胞自噬而增强DDP的作用,进而抑制人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞的增殖、侵袭、黏附并促进细胞凋亡作用,具有协同作用。金柱,高宝安 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
Akt激酶抑制剂MK-2206诱导U2OS人骨肉瘤细胞凋亡与自噬
目的:研究Akt抑制剂MK-2206对U2OS细胞凋亡和自噬的影响。方法:采用MTT法检测MK-2206对U2OS细胞活力的影响,DNA片段末端标记试剂盒检测细胞凋亡的变化,免疫印迹法检测细胞内蛋白的表达,用LC3-II的表达量用来确定细胞的自噬水平。结果: MK-2206剂量依赖性地降低了U2OS细胞的活力;MK-2206能够促进caspase-9、caspase-3和PARP的活化切割而诱导U2OS细胞发生凋亡;MK-2206给药后可促进细胞内LC3-II的表达,氯喹阻断自噬后明显增强了MK-2206对U2OS细胞活力的抑制作用。结论: Akt 抑制剂MK-2206能够诱导U2OS细胞发生凋亡和自噬;抑制自噬可促进MK-2206对U2OS细胞的毒性。王雪莹,李照梅,周运生,郭文莉,王凤泽 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
胞外高浓度ATP诱导SH-SY5Y细胞的自噬和凋亡
目的:观察胞外高浓度ATP损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,探讨损伤中自噬和凋亡发生的规律和特点。方法:培养的SH-SY5Y细胞按照加入ATP的浓度和作用时间进行分组。 CCK-8法检测细胞生存率,单丹磺酰戊二胺染色检测自噬空泡的变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率变化,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3( caspase-3)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ( microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)的表达。结果:(1)与对照组相比,不同浓度(3、6、9、12、15 mmol/L)的ATP作用3 h均使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,且呈剂量依赖性;不同作用时间(1、2、3、6 h)ATP(6 mmol/L)也可使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,3 h达高峰,呈时间依赖性。(2) ATP作用1 h时SH-SY5Y细胞自噬空泡显著增多(P<0.05),随时间延长,6 h时降到对照水平;ATP作用1 h时,LC3-Ⅱ表达显著增强(P<0.05),形成高峰,与自噬空泡增多的时点重合,2 h、3 h时LC3-Ⅱ表达水平逐渐减弱,6 h时降到对照水平。(3)与对照组相比,ATP作用3 h后细胞凋亡率达高峰(P<0.05),6 h时仍然保持在3 h的水平;cleaved caspase-3表达量同步增强(P<0.05),6 h时达高峰。结论:胞外高浓度ATP能够诱导SH-SY5Y细胞自噬和凋亡;自噬增强在前,凋亡高潮在后;随着ATP作用时间的延长,凋亡占主导地位。卢娜,白瑞樱,魏林郁,李超堃,李新娟,赵红岗,李东亮 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
自噬与人类疾病最新研究进展
自噬在人类疾病的发病、发展中起双重作用.自噬是发生在真核细胞内的一种内稳态过程,双层膜包绕着要降解的细胞器等形成自噬体,随后与溶酶体融合,对组分进行降解和回收再利用.近年来,许多研究表明自噬和人类疾病密切相关.自噬广泛存在于肿瘤、新陈代谢、神经退化紊乱和肺疾病等各种病理过程中.深入了解自噬的分子基础,对人类疾病诊断以及寻找药物作用新靶点具有重要意义.刘艳,刘中洋,袭荣刚,王晓波 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
阿尔茨海默病小鼠模型中骨髓间充质干细胞的神经分化
目的:探讨淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠(阿尔茨海默病小鼠模型)骨髓间充质干细胞(MSCs)的神经分化及其与参与调节干细胞分化的Notch1信号通路的关系,观察分化的骨髓间充质干细胞中自噬的变化.方法:实验分为APP转基因小鼠组(APP组)和野生型小鼠组(WT组).采用β-巯基乙醇诱导小鼠MSCs分化为神经细胞;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测诱导后β淀粉样蛋白40(Aβ40)和42(Aβ42)的水平;采用免疫细胞化学染色法和Western blotting检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白2(MAP-2)的表达变化;Western blotting检测Notch1、Notch胞内域(NICD)和Hes5的水平.结果:与野生型小鼠相比,APP转基因小鼠的骨髓间充质干细胞具有更强的神经分化能力、更高的Aβ表达及更强的Notch1信号抑制.但是,自噬作为神经细胞存活和神经功能必不可少的条件,在分化后的APP 转基因小鼠来源的MSCs中受损.结论:过表达APP可能通过抑制Notch-1信号通路增强小鼠骨髓间充质干细胞神经分化的能力,而分化后的APP转基因小鼠MSCs出现自噬通路异常.高慧丽,张广宇,段冉冉,李燕飞,王笑寒,彭涛,关文娟,贾延劼 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
糖尿病肾病缺氧诱导因子1α与自噬的相关性研究
糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病患者继心血管并发症的第二大死亡原因,已成为目前我国终末期肾病(end stage renal disease,ESRD)的主要病因[1].肾间质纤维化是包括DN在内的各种慢性肾脏疾病进行性发展的共同病理基础.研究证实[2],慢性缺氧是导致肾间质纤维化的杜绒贵 - 临床荟萃文章来源： 万方数据
科创中国
