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急性缺氧肺动脉平滑肌细胞线粒体活性氧变化的观察

目的:观察急性缺氧时大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)线粒体活性氧(ROS)的变化.方法:分离并培养大鼠PASMCs,常氧(35℃、5%CO2、21%O2、74%N2)和急性缺氧(35℃、5%CO2、1%O2、94%N2)条件下,利用分子探针chloromethyl dichlorodihydrofluorescein diacetate(CM-H2DCF/DA)和Redox Sensor Red CC-1通过激光共聚焦显微镜来检测细胞内ROS的生成量;直接分离线粒体,用线粒体电子传递链(ETC)复合物抑制剂通过荧光分光光度计检测线粒体ROS及其生成的具体位点.结果:急性缺氧细胞内ROS生成明显增加,其中缺氧组H2O2较常氧组增加3.35倍(P<0.01),而H2O2及O-·2较常氧组增加1.61倍(P<0.01).与缺氧组比,用线粒体ETC复合物I抑制剂MPP、复合物II抑制剂NPA和TTFA及复合物III前泛半醌位点抑制剂myxothiazol都能显著降低缺氧时PASMCs胞内ROS的生成量(分别降低60%、73%、75%和61%,P<0.01);而复合物III后泛半醌位点抑制剂antimycin A及复合物IV抑制剂Na N3对ROS的生成无明显影响(升高13%和9.1%,P>0.05).直接检测线粒体ROS与测定细胞内ROS结果一致.结论:急性缺氧PASMCs线粒体ROS(主要是H2O2)的生成量明显增加;其生成位点主要是线粒体ETC复合物Ⅰ、Ⅱ及III前泛半醌位点,而与复合物III后泛半醌位点和IV位点无明显关系.

杨朝,耑冰,张丽萍,赵霞,张建银,葛利军,吴昌归 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

低氧诱导的小窝蛋白-1上调参与人肺腺癌细胞A549迁移和侵袭

目的:探讨低氧诱导剂二氯化钴(CoCl2)对小窝蛋白-1(Cav-1)生成的调节作用及后者对人肺腺癌A549细胞迁移、侵袭的影响.方法:检测肺癌患者伴恶性胸水(MPE)和结核性胸膜炎患者胸水(TBPE)中Cav-1和缺氧诱导因子(HIF)-1α浓度,比较两者相关性;以CoCl2和(或)HIF-1α抑制剂YC-1作用于A549细胞ELISA法检测细胞上清Cav-1和HIF-1α浓度;分别采用细胞划痕实验及Transwell小室侵袭实验研究CoCl2刺激表达的Cav-1对A549细胞迁移和侵袭的影响.结果:MPE中Cav-1和HIF-1α浓度明显高于TBPE,两组患者胸水中Cav-1与HIF-1α均呈正相关.CoCl2浓度和时间依赖性诱导A549细胞Cav-1和HIF-1α生成,200μmol/L或24 h达到峰值;浓度>200μmol/L或作用时间超过24 h则呈现浓度或时间依赖性抑制.HIF-1α抑制剂YC-1浓度依赖性抑制HIF-1α和Cav-1生成.CoCl2浓度依赖性增强A549细胞迁移和侵袭,200μmol/L作用最强;YC-1对上述过程产生抑制效应.结论:肺癌患者胸腔积液中Cav-1浓度升高,低氧诱导Cav-1生成的变化可能参与了A549细胞迁移和侵袭,HIF-1α可能对Cav-1生成发挥影响.

左蓓,刑敏,孙珍贵,汪向海,陈兴无 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

川芎嗪对支气管肺发育不良新生大鼠缺氧诱导因子通路表达的影响

目的:观察川芎嗪对新生大鼠支气管肺发育不良的防治作用并探讨其可能的作用机制.方法:选取80只足月新生12h内的sD大鼠,随机分成4组,每组20只.A组:空气对照组;B组:空气±川芎嗪组;C组:高氧对照组(FiO:=60%);D组:高氧±川芎嗪组.B、D组予以川芎嗪30mg/kg连续给药14d.每组选取8只,计算肺湿重/干重(W/D)、肺放射状肺泡计数(RAC);免疫组织化学方法检测PECAM-l的表达水平并计算肺微血管密度(yvc);RT-PCR方法检测HIF-1α及VEGFmRNA水平;免疫组织化学染色法检测HIF-1α及VEGF蛋白水平.结果:c组肺泡及肺血管发育明显受到抑制,肺W/D值升高,RAC、MVC值较A组和B组均明显减少[W/D:(5.64±0.31)粥(4.92±0.19)、(4.91±0.06);RAC值:(4.75±0.71)销(9.00±0.76)、(9.03±0.76);MVC:(45.30±2.05)∞(48.70±0.83)、(48.60±1.49),P〈0.05];C组肺组织HIF-1α、VEGF表达较A组明显减少,D组肺组织HIF一1α、VEGF表达较c组有所增加,差异均有统计学意义(P〈0.05).结论:川芎嗪对新生鼠支气管肺发育不良有一定的防治作用,其机制可能与川芎嗪激激活HIF一1α-VEGF通路,从而改善肺泡和肺微血管发育有关.

胡倩,刘晓红,周高枫,郑跃杰 - 儿科药学杂志

文章来源：万方数据

液体冲击试验可很好地发现隐匿性肺静脉高压

确定肺血管高压的病因往往非常困难,目前,可通过肺楔压(PWP)来鉴别肺动脉高压(PAH)与肺静脉高压(PVH,PWP〉15mmHg为PVH,1mmHg=0.133kPa).通过右心导管来监测肺血管压力的患者往往处于脱水状态,血容量有所下降,这很可能导致测得的PWP值低于实际值,容易造成PAH的漏诊.

罗红敏 - 中华危重病急救医学

文章来源：万方数据

丁苯酞可减轻缺氧缺糖条件下血管内皮细胞的线粒体损伤

目的:探讨丁苯酞(DL-3-n-butylphthalide,NBP)对缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)条件下内皮细胞中线粒体的保护作用及相关机制.方法:对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)予以OGD损伤,使用MitoTracker Green对线粒体进行定位并观察线粒体形态的变化.使用MitoSOX Red标记线粒体内的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS),免疫荧光法观察NBP对OGD条件下细胞线粒体内ROS产生的影响.使用SOD活性试剂盒检测NBP对OGD条件下HUVECs内SOD活性的影响.结果:NBP明显减少了OGD诱导后内皮细胞中线粒体的断裂,抑制了线粒体内ROS的生成,提高了OGD诱导后细胞内SOD的活性.结论:NBP可能是通过保护OGD条件下内皮细胞线粒体的功能和增加细胞内ROS清除,减少线粒体内ROS生成,最终减轻了线粒体损伤.

解龙昌,张波,高庆春,傅贤,李又福,刘红英,魏欢 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

肺靶向干扰RNA抑制血管生成素-2可改善脓毒症多器官功能障碍和死亡

血管生成素-2是通过刺激血管内皮细胞分泌的一种蛋白质,也是血管内皮细胞稳定受体Tie2的拮抗剂,参与脓毒症多器官功能障碍的病理生理过程.针对促血管生成素-2这一靶点,有学者通过动物实验测试了特定RNA干扰的肺血管内皮细胞治疗策略对脓毒症的治疗潜力.实验通过盲肠结扎穿孔或静脉注射脂多糖制备脓毒症小鼠模型,在制模前后分别静脉注射肺血管内皮细胞特异性促血管生成素-2小干扰RNA.

喻文,罗红敏 - 中华危重病急救医学

文章来源：万方数据

血管外肺水指数对急性呼吸窘迫综合征患者预后的评价

目的评价血管外肺水指数(EVLWI)和肺血管通透性指数(PVPI)与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)柏林标准严重程度分级的关系,探讨其对疾病严重程度及预后的临床评估价值.方法回顾性分析54例行脉搏指示持续心排血量(PiCCO)监测的ARDS患者的临床资料,并根据患者入选时的氧合指数(OI)值分为轻、中、重度3组.分别记录轻、中、重度患者入选时特征、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分,比较不同程度ARDS患者的EVLWI值与PVPI值.分析EVLWI与胸腔内血容量指数(ITBVI)、PVPI、OI的相关性,并用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估各指标对预后评价的准确性.结果 54例患者中轻度ARDS 18例,中度ARDS 22例,重度ARDS 14例.随ARDS患者疾病严重程度的增加,其28 d病死率逐渐增加,中、重度病死率明显高于轻度[54.5%(12/22)、57.1%(8/14)比22.2%(4/18),均P<0.05].54例患者72 h内独立测量PiCCO指标216次,显示EVLWI随ARDS严重程度增加而增加[轻、中、重度患者EVLWI分别为11(10,13)、14(11,16)、17(12,23) mL/kg,U=15.556,P=0.000],PVPI的变化趋势与EVLWI相同[轻、中、重度患者PVPI分别为2.0(1.8,2.5)、2.7(2.0,3.9)、3.7(2.1,4.8),U=16.552,P=0.000].EVLWI与OI呈显著负相关(r=-0.599,P=0.000),PVPI与OI呈显著负相关(r=-0.541,P=0.000),EVLWI与PVPI呈显著正相关(r=0.811,P=0.000),EVLWI与ITBVI呈正相关(r=0.168,P=O.041).0、24、48、72 h的EVLWI值及APACHEⅡ评分对预后评价的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.639±0.082、0.642±0.082、0.702±0.078、0.719±0.076、0.783±0.068,95%可信区问(95%0)分别为0.479 ~ 0.799、0.483 ~ 0.802、0.551 ~ 0.852、0.570 ~ 0.869、0.648 ~0.918; 72 h EVLWI> 13 mL/kg时,预后评价的敏感度为81.8%,特异度为61.5%.结论柏林标准与EVLWI、PVPI结合起来可以准确评估ARDS的严重程度,动态观察ARDS患者EVLWI可作为预后的评价指标之一.

孙丽晓,高心晶,李智伯,冯全胜,王志勇,汪维杰,徐磊 - 中华危重病急救医学

文章来源：万方数据

Ezrin蛋白在肿瘤坏死因子致大鼠肺微血管内皮细胞炎性损伤中表达及Rac 1信号通路的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)中Ezrin蛋白及其磷酸化(p-Ezrin)表达的变化,以及小G蛋白家族成员Rac 1对其的影响.方法将体外培养的SD大鼠PMVEC分别进行TNF-α刺激时效实验和Rac 1通路干预实验.①时效实验:以10μg/L TNF-α分别刺激PMVEC 0、0.25、0.5、1、3、6、12、24 h后,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测Ezrin及p-Ezrin的表达.②Rac 1通路干预实验:以200μmol/L Rac 1特异性抑制剂NSC 23766与PMVEC预孵育0.5 h再加入10μg/L TNF-α继续孵育,3 h后检测p-Ezrin表达,同时设空白对照组(1%胎牛血清)及TNF-α或NSC 23766单独刺激组.结果①PMVEC中仅低量表达Ezrin,且TNF-α刺激对Ezrin无明显影响.TNF-α刺激PMVEC 0 h时p-Ezrin蛋白表达〔即p-Ezrin/Ezrin(灰度值)〕为0.21±0.03,刺激0.25 h时p-Ezrin蛋白表达即开始升高(0.53±0.19),3 h达高峰(1.68±0.30),然后逐渐下降,24 h时仍高于基础水平(0.87±0.18),组间比较差异有统计学意义(F=62.200,P=0.000),说明TNF-α可呈时间依赖性增加Ezrin磷酸化.②与空白对照组比较,TNF-α和NSC 23766单独刺激组均能诱导p-Ezrin表达增加(TNF-α组:0.92±0.12比0.68±0.16, t=-2.864,P=0.020;NSC 23766组:1.33±0.24比0.68±0.16,t=-5.429,P=0.000);NSC 23766与TNF-α共同孵育可使p-Ezrin表达较TNF-α单独刺激组进一步增加(2.14±0.18比0.92±0.12,t=-14.670,P=0.000),各组间差异有统计学意义(F=73.810,P=0.000).结论 Ezrin磷酸化表达增加参与了TNF-α诱导的PMVEC损伤,抑制Rac 1信号通路可通过上调Ezrin磷酸化表达参与TNF-α对PMVEC的致伤效应.

唐思慧,岳扬,孙耕耘 - 中华危重病急救医学

文章来源：万方数据

PICCO心肺容量监护仪在原位肝移植麻醉中的应用

目的研究脉搏指示持续心输出量(pulse indicated continue cardiac output,PICCO)心肺容量监护仪在原位肝移植麻醉过程中的应用价值.方法选择我院2009 -2011年肝胆外科原位肝移植患者24例,年龄(48 ±20)岁,手术开始前、门静脉阻断前、无肝期45 min与2h、新肝期及手术结束前,采用PICCO心肺容量监护仪监测并记录麻醉过程中的平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)、心排量(cardiac output,CO)、外周血管阻力(peripheral vascular resistance,SVR)、每搏量变异指数(stroke volume variation,SVV)、胸腔内血容量(intra-thoracic cavity blood volume,ITBV)、血管外肺水容量(extravascular lung water,EVLW),对比分析上述指标在各时间点的变化.结果肝移植患者术前CO、ITBV和EVLW均升高(P<0.05),SVR降低(P<0.05),经过输注白蛋白、红细胞、血管活性药物及利尿等处理后,门静脉阻断前、无肝期45 min与2h、新肝期及手术结束前SVR显著升高(P<0.05),ITBV显著下降(P<0.05),EVLW有所下降,余指标无明显变化.结论 PICCO心肺容量监护仪可及时反映肝移植麻醉过程中循环动力学、血容量及血管外肺水含量,有助于肝移植麻醉的容量调控,同时可有效协助肝移植患者平稳度过麻醉及围术期.

曹剑,易斌,甯交琳,王恩琴,崔剑,鲁开智,陶国才 - 第三军医大学学报

文章来源：万方数据

CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠额叶皮质及海马 CREB 与 pCREB 表达的影响

目的:观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠额叶皮质和海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)表达及其磷酸化(pCREB)的影响,初步探讨CCK-8调节吗啡戒断大鼠的受体后机制。方法:建立大鼠吗啡慢性依赖及纳络酮催促戒断模型,并给予CCK-8、CCK1受体拮抗剂L-364718和CCK2受体拮抗剂LY-288513慢性干预,应用Western blotting和免疫组织化学技术观察额叶皮质和海马CREB与pCREB 表达的变化。结果:(1)正常组大鼠额叶皮质神经元胞浆、胞核均表达CREB蛋白,pCREB蛋白则仅在胞核中高表达;海马CA1区锥体细胞层神经元中,CREB蛋白在胞浆中高表达,胞核低表达,pCREB蛋白则仅在胞核中表达。(2)慢性吗啡作用后CREB无明显变化, pCREB增加;急性纳洛酮催促戒断后CREB仍无明显变化, pCREB进一步升高。(3)与戒断组相比,CCK-8、L-364718和LY-288513慢性干预对吗啡依赖戒断大鼠额叶皮质CREB蛋白表达无明显影响,pCREB蛋白表达均明显降低;L-364718和LY-288513慢性干预后,海马CREB与pCREB表达均明显降低,而CCK-8慢性干预对CREB蛋白表达无明显影响,仅pCREB蛋白表达明显降低。结论:CCK-8及其受体拮抗剂可能通过调节核转录因子CREB减轻吗啡戒断症状,并具有脑区特异性。

高平蕊,马兴友,文迪,杨胜昌,于峰,倪志宇,李淑瑾,马春玲,丛斌 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据