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脂多糖通过PI3彰Akt/mToR通路调控巨噬细胞自噬

目的:观察脂多糖对巨噬细胞自噬活化的影响及相关信号通路的探讨.方法:体外培养巨噬细胞株RAW264.7,分为对照组、饥饿状态激活自噬组、单纯脂多糖(LPS)刺激组、LPS+P13K抑制剂(hVps34)组和LPS+roTOR抑制剂(雷帕霉素)组.构建荧光真核表达载体pcDNA3.1.GFP-LC3,转染巨噬细胞,通过荧光显微镜观察各组细胞中自噬体形成情况.qRT.PCR方法检测各组中与细胞自噬相关的Atg5、Atg7、LC3一II和Bnip3mRNA表达水平的改变.利用Westernblotting检测LC3-II、P-Akt和p-roTOR蛋白在各组中的表达情况,以评价LPS激活巨噬细胞自噬的分子通路.结果:成功构建稳定表达GFP.LC3的巨噬细胞,在荧光显微镜下可以观察到自噬在饥饿状态组、LPS+hVps34组和U玛+雷帕霉素组均有明显增强;qRT-PCR检测到Atg5、LC3-II和Bnip3mRNA的表达在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组均有明显增强,而在LPS组中略微下降;Westernblotting检测发现p-Akt在饥饿状态组、LPS组和LPS+雷帕霉素组中表达明显升高;p-mTOR在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组表达明显下降;LC3-II的表达在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组中表达要高于对照组和LPS组.结论:LPS参与巨噬细胞自噬的调控,其可能的信号通路为P13K/Akt/mTOR通路,但仍存在其它有效的调控通路.

杜涛,黄海,陈欣,丁红,张睿,刘梅兰,陈慧 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

亚低温对脂多糖诱导巨噬细胞Toll样受体4 mRNA转录及炎症平衡的影响

目的探讨亚低温对脂多糖(LPS)刺激下巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA转录及下游炎症平衡的影响.方法实验用RAW264.7小鼠巨噬细胞株,将细胞分别置于37 ℃和32℃的温育箱中培养,干预组加入10 ng/mL LPS进行刺激,对照组加入等量生理盐水.分别于培养2、8、24h取细胞上清液检测白细胞介素(IL-1β、IL-10)水平;用TRIzol提取细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4 mRNA的转录水平.结果 LPS刺激下,常温组和亚低温组TLR4 mRNA表达水平均呈先升高、后降低的趋势(均P< 0.001);同一时间点,亚低温组TLR4 mRNA表达水平(2-AAC)均明显低于常温组(2 h:9.19 ±0.57比10.08±1.02,t=-2.285,P=0.036;8 h:13.58±1.57比15.24±1.63,t=-2.201,P=0.042;24 h:6.85±1.17比8.17±1.21,t=2.353,P=0.032).LPS刺激下,常温组和亚低温组随时间延长IL-1β、IL-10均逐步增高(均P<0.001);同一时间点,亚低温组IL-1β(ng/L)明显低于常温组(2 h:87.08±29.35比110.53±26.58,t=1.777,P=0.047;8 h:119.19±49.14比173.25±37.21,t=2.631,P=0.018;24 h:208.66±53.83比346.56±64.30,f =4.933,P<0.001);IL-10(ng/L)明显高于常温组(8 h:170.01±24.90比140.02±15.08,t=-3.091,P=0.007;24 h:423.10±52.40比165.06±31.97,t=-12.611,P<0.001).随着LPS刺激时间的延长,常温组IL-1B/IL-10比值逐渐升高(F=20.003,P<0.001),亚低温组IL-1 β/IL-10比值则逐渐降低(F=1.811,P=0.185);同一时间点,亚低温组IL-1WIL-10比值明显低于常温组(2h:0.740±0.214比0.993±0.256,t=2.275,P=0.037;8 h:0.701±0.363比1.237±0.455,t=2.763,P=0.014;24 h:0.493±0.292比2.099±0.428,t=9.299,P<0.001).结论亚低温可以降低LPS刺激下巨噬细胞TLR4 mRNA的转录水平,相对降低IL-1β水平,但保留了更高水平的IL-10,使炎症平衡向抗炎方向发展.

汪首振,汤展宏,胡军涛,蒋良艳,尹祥 - 中华危重病急救医学

文章来源：万方数据

微小RNA-132在脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应中的表达变化

目的观察脂多糖(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应后微小RNA-132(miR-132)的动态变化,以初步探讨miR-132在肺泡巨噬细胞炎症反应中的作用.方法将体外去致热源培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383分为空白对照组和以终浓度1 mg/LLPS刺激3、6、12及24 h组,分别收集各时间点上清液及细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中炎症因子肿瘤坏死因子-cα (TNF-α)、白细胞介素(IL-1β和IL-6)的含量,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-132的表达.结果与空白对照组相比,LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后3h上清液中TNF-α含量(ng/L:364.83±46.29比34.07±8.62,P<0.01)、IL-1β含量(ng/L:153.83±43.67比32.33±10.62,P<0.05)、IL-6含量(ng/L:183.85±43.52比42.62±11.21,P<0.05)即明显升高,随时间延长均逐渐升高至12h达峰值(TNF-α:605.09±57.13,IL-1β:377.09±28.55,IL-6:558.04±77.45,均P<0.01),24 h时均有所下降(TNF-α:281.95±41.61,IL-1β:263.17±51.36,IL-6:438.74±79.94),但仍显著高于空白对照组(均P<0.01).LPS刺激后3 h,miR-132表达水平较空白对照组上调了(1.12±0.11)倍(P=0.995),6、12、24h miR-132表达较空白对照组分别上调了(5.98±0.65)、(7.64±0.53)和(8.92±0.83)倍(均P<0.01).结论 LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应后,miR-132表达随时间延长逐步上调,其可能参与调控大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应.

刘芬,江榕,李勇,曾振国,赵宁,夏亮,聂成,钱克俭 - 中华危重病急救医学

文章来源：万方数据

辣椒素对脂多糖诱导血管内皮细胞活化的影响及机制

目的:探讨辣椒素对脂多糖(LPS)刺激后小鼠主动脉内皮细胞活化的影响,并探讨其可能机制.方法:(1)体外分离培养小鼠主动脉内皮细胞,免疫荧光鉴定内皮细胞特异性标志.(2)以100μg/L LPS作用于血管内皮细胞后,以不同浓度的辣椒素(50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L)进行干预,分别于12、24和48 h收集主动脉血管内皮细胞及细胞上清液.采用ELISA法检测各组细胞上清液中的可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)、可溶性血管细胞黏附分子1(sVCAM-1)和可溶性P-选择素(sP-selectin)水平,Western blotting法检测各组主动脉血管内皮细胞核内NF-κB p65水平和胞浆p-IκBα、IκBα水平.结果:与对照组相比,LPS组细胞上清液中sP-selectin、sICAM-1和sVCAM-1含量显著升高(P<0.05),LPS能够时间依赖性上调sICAM-1和sVCAM-1的含量.与同时点的LPS组相比,辣椒素能够剂量依赖性下调sP-selectin、sICAM-1和sVCAM-1水平.与对照组相比,LPS作用24 h后,细胞核内NF-κB p65和胞浆p-IκBα蛋白水平显著升高(P<0.05),胞浆IκBα蛋白水平显著降低(P<0.05).与同时点LPS组相比,辣椒素能够剂量依赖性下调细胞核内NF-κB p65和胞浆p-IκBα蛋白的水平(P<0.05),剂量依赖性上调胞浆IκBα蛋白水平(P<0.05).结论:辣椒素能够显著抑制LPS作用后血管内皮细胞活化水平,该效应可能是通过下调IκBα降解和NF-κB p65胞核内转位而实现的.

卢阳,赵光举,洪广亮,邱俏檬,李冬,卢中秋 - 中国病理生理杂志

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人参二醇组皂苷具有与地塞米松类似的改善LPS处理小鼠肾功能的作用

目的:研究人参二醇组皂苷(PDS)和地塞米松(DEX)是否具有类似的减轻LPS诱导的小鼠急性肾损伤(AKI)的作用,并探讨它们的作用机制.方法:C57BL/6小鼠随机分为4组,除对照组腹腔注射生理盐水外,其余3组均经腹腔注射LPS 10 mg/kg,PDS组和DEX组小鼠在LPS注射前1h分别经腹腔注射PDS(25.0 mg/ks)或DEX(2.5 mg/kg).12 h后麻醉下取血和肾脏组织备生物化学与免疫印迹检测.结果:LPS组小鼠血尿素氮和肌酐含量显著高于对照组(P<0.01),而PDS组和DEX组则明显低于LPS组(P<0.05);PDS和DEX上调LPS处理的小鼠肾组织IκB蛋白的表达,抑制NF-κB信号通路的活化,进而减少TNF-α和IL-6的产生;PDS和DEX均能下调LPS处理的小鼠肾脏诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,上调肾组织锰过氧化物歧化酶的表达,减轻肾脏的氧化应激损伤.此外,PDS和DEX均明显上调LPS处理的小鼠肾脏组织细胞核糖皮质激素受体蛋白的含量.结论:人参二醇组皂苷具有与DEX相类似的减轻LPS诱导的小鼠AKI的作用,而且,它们的作用机制相似,但PDS的药效学是否也通过糖皮质受体介导还需进一步研究.

陈燕,杜艳伟,王晓琴,付双,刘莲勤,于淇,方圆,高品,杨光 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

骨髓来源间充质干细胞培养上清液减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的:观察经尾静脉输注骨髓间充质干细胞培养上清液(MSCs CdM)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的治疗作用及其机制.方法:采用全骨髓培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,传至第3代时观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志,并且收集上清液用超滤离心管进行离心.30只BALB/c小鼠随机分为对照组、LPS模型组和MSCs CdM治疗组.对照组腹腔内注射生理盐水(0.01 mL/g),LPS组和MSCs CdM治疗组腹腔内注射LPS(5 mg/kg,0.01 mL/g)制备急性肺损伤模型.造模1h后经尾静脉输注MSCs CdM(MSCs CdM治疗组)或生理盐水(LPS组或对照组)300 μL.6h后处死小鼠,留取标本检测肺组织病理形态学、肺组织湿干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量、血清及BALF中细胞因子水平和肺组织中髓过氧化物酶(MPO)的活性.结果:与对照组比较,LPS处理后肺组织病理损伤严重,BALF中蛋白、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量、肺组织中MPO活性及肺组织湿干重比均显著升高.与LPS组比较,MSCs CdM治疗组肺组织病理损伤程度减轻,BALF中蛋白、血清TNF-α和IL-6含量、肺组织中MPO活性及肺组织湿干重比均显著降低,而BALF中白细胞介素10 (IL-10)和角质细胞生长因子(KGF)水平显著高于LPS组和对照组.结论:骨髓间充质干细胞培养上清液可有效减轻LPS诱导的急性肺损伤,其作用机制可能与其调节肺部TNF-α、IL-6、IL-10和KGF的水平有关.

许欣婷,董明清,胡美,徐敦全,李志超,吴昌归 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

重组旋毛虫53000抗原蛋白通过激活M2型巨噬细胞减轻脂多糖对肝脏的损害

目的研究重组旋毛虫53 000抗原蛋白(rTsP53)是否通过激活M2巨噬细胞减轻脂多糖(LPS)所致肝损害.方法 60只雄性BALB/c小鼠,按随机数字表法分为LPS组、LPS+磷酸盐缓冲液(PBS)组及rTsP53干预组,每组20只.3组动物禁食8h后腹腔注射15 μg/kg LPS;LPS+ PBS组在注射LPS后1h注射等量PBS;rTsP53干预组在注射LPS后1h注射5 mg/kg rTsP53蛋白.干预后48 h处死小鼠,提取腹腔巨噬细胞,用流式细胞仪检测巨噬细胞标志物CCR7(M1型)及CD206(M2型)表达变化;取肝脏组织制作切片,苏木素-伊红(HE)染色观察病理改变,双染色免疫荧光检测F4/80(+)HLA-DR(+)及F4/80(+)CD163(+)表达情况;取外周血,检测血清天冬氨酸转氨酶(AST)及丙氨酸转氨酶(ALT)水平.结果与LPS组、LPS+ PBS组比较,rTsP53干预组小鼠生存率明显提高(90%比25%、30%,均P<0.01);肝脏病理损害减轻,组织结构明显改善;血清ALT、AST水平明显降低[ALT (U/L):97.7±8.5比181.7±19.5、173.7±17.2,AST(U/L):142.7±12.1比235.7±9.9、213.7±6.7,均P<0.05];腹腔巨噬细胞FITC-CD206(+)比例明显升高[(17.75±0.30)%比(1.38±0.13)%、(1.36±0.05)%,均P<0.05],腹腔巨噬细胞PE-CCR7(+)比例明显下降[(6.89±0.11)%比(15.30±0.64)%、(14.96±0.93)%,均P< 0.05];肝组织切片内F4/80(+)CD163(+)细胞表达荧光强度明显增强(0.36±0.01比0.29±0.02、0.31±0.01,均P<0.05),而F4/80(+)HLA-DR(+)荧光强度则无明显差异(0.30±0.01比0.30±0.02、0.31±0.01,均P>0.05).LPS组与LPS+ PBS组各指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 rTsP53蛋白可以通过促进体内M2型巨噬细胞活化,减轻LPS所致肝组织损害,提高动物生存率.

陈志斌,唐皓,李振宇,梁艳冰,吴敬国,曾丽金,杨青,梁华平,马中富 - 中华危重病急救医学

文章来源：万方数据

亚低温对脂多糖诱导急性肺损伤大鼠肺组织TLR2/MyD88信号转导通路的影响

目的:研究亚低温对脂多糖(LPS)吸入导致的急性肺损伤(ALI)大鼠Toll样受体2/髓样分化因子88(TLR2/MyD88)通路中TLR2、MyD88、核转录因子-κBp65(NF-κBp65)及相关炎性蛋白纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达的影响.方法将90只雄性SD大鼠按随机数字表法分成对照组(n=18)、亚低温组(n=24)、控温组(n=24)、非控温组(n=24).用气管内滴入LPS 0.5 mL/kg方法建立ALI模型,对照组滴入等量生理盐水;1 h后取颈动脉血并予以物理降温,亚低温组、控温组分别控制肛温在32~34℃、36~37℃,对照组、非控温组体温不加干预.分别于制模前、制模后1 h及干预后1、6、12 h进行血气分析;分别于干预后1、6、12 h处死大鼠,光镜下观察肺组织病理改变并进行半定量评分;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中PAI-1蛋白表达;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织TLR2 mRNA、MyD88 mRNA表达;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肺组织NF-κBp65蛋白表达.结果滴入LPS后,各组氧合指数(PaO2/FiO2)明显降低,肺组织损伤加重,肺损伤评分、BALF中PAI-1、肺组织TLR2 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κBp65蛋白表达均明显升高.给予亚低温治疗后各指标均明显改善,亚低温疗程持续6 h时效果最好,持续6~12 h可能获益.与控温组比较,亚低温组PaO2/FiO2(mmHg,1 mmHg=0.133 kPa)于干预后1 h、6 h明显升高(1 h:402.49±38.61比324.36±28.93,6 h:349.72±98.20比284.35±13.68,均P<0.01);肺损伤评分(分)于干预后1、6、12 h明显降低(1 h:6.04±0.74比7.96±0.65,6 h:9.09±0.80比13.13±1.02,12 h:10.79±1.42比13.42±0.68,均P<0.01);BALF中PAI-1蛋白表达(ng/L)于干预后1、6、12 h明显下降(1 h:121.36±4.62比197.74±9.42,6 h:230.53±10.76比294.06±16.60,12 h:270.48±13.20比319.40±10.24,均P<0.01?

赖洁,汤展宏,胡军涛,周威,张驰,陈显峰 - 中华危重病急救医学

文章来源：万方数据

盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA表达的影响

目的研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响.方法培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10 μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10 μg/mL LPS和50 μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10 μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10 μg/mL LPS和200 μg/mL盐酸米诺环素).实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1β mRNA表达的影响.结果 IL-1β mRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1β mRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系.

邱枫,段昌华,冷颖,赵旭东,朱志平 - 广东牙病防治

文章来源：万方数据

a7nAChR参与生理浓度糖皮质激素的抗炎作用

目的:探讨胡烟碱型乙酰胆碱受体(a7nAChR)在生理浓度糖皮质激素(GCs)抗炎过程中的作用.方法:MTT法检测不同浓度氢化可的松对小胶质细胞BV-2活性的影响;在建立LPS刺激的BV-2细胞炎症模型基础上,实验分组如下:(1)空白对照组;(2)LPS组;(3)GCs+LPS组;(4)a7nAChR阻断剂甲基牛扁亭碱(MLA)+GCs+LPS组,ELISA法测定细胞上清中TNF-a和IL-1B的含量.结果:2000和1000nmol/L氢化可的松可分别使细胞存活率降低至(76.9±5.5)%和(90.8±7.3)%,表现出超生理剂量GCs的细胞损伤作用.LPS明显刺激BV-2细胞释放TNF-a和IL-1B,并呈现时间和剂量依赖性.生理浓度(500和250nmol/L)的氢化可的松均可减少LPS诱导BV-2细胞释放TNF-a和IL-1B,10nmol/LMLA预处理BV-2细胞能拮抗GCs抑制炎症因子释放的作用.结论:ot7nAChR参与了生理浓度GCs的抗炎作用.

陈依雨,吕俊华,张梅 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据