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人LMP-1基因腺病毒蚕组体的构建及其在骨肉瘤细胞U20S中的表达
目的:构建表达人LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)基因的腺病毒重组体,体外感染骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)细胞系U2OS,并鉴定LMP-1基因在U2OS中的表达.方法:以K562细胞的cDNA为文库,采用PCR方法对LMP-1进行扩增,通过TA克隆与pGEM-T载体连接并DNA测序.双酶切后并将目的基因插入至腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,对腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1行双酶切和DNA测序鉴定,并通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测pAdtrack-CMV-LMP-1在HEK-293T细胞中的表达.线性化pAdtrack-CMV-LMP-1,在BJ5183菌内完成与骨架质粒pAdeasy-1的同源重组,构建重组腺病毒质粒Ad-LMP-1.通过脂质体介导,在HEK-293A细胞内包装出复制缺陷的重组腺病毒Ad-LMP-1,大量扩增、纯化并测定滴度.用Ad-LMP-1感染OS细胞系U2OS,通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测LMP-1在U2OS细胞中的表达.结果:双酶切和DNA测序鉴定穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1构建成功,荧光显微镜证实转染了pAdtrack-CMV-LMP-1质粒的HEK-293T细胞内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot验证了LMP-1基因的表达量明显高于对照组.通过扩增、纯化,Ad-LMP-1滴度达到1.5*109pfu/ml.荧光显微镜下观察重组腺病毒感染的U2OS内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot检测发现重组腺病毒感染U2OS后,LMP-1的mRNA和蛋白表达量明显高于对照组.结论:成功构建了人LMP-1基因腺病毒重组体,为进一步的实验研究奠定了基础.刘会文,黄路,韩智敏,罗嘉全,杨东,詹平,戴闽,曹凯 - 重庆医科大学学报文章来源： 万方数据 -
非物质文化空间数据库与地图表达方法-基于蔚县剪纸的实证研究
本文提出了"文化景观→文化载体→空间数据库→载体联合→文化景观"的非物质文化空间数据库与地图化表达模式,为开展系统性文化地理研究奠定基础.蔚县剪纸的实证研究中,通过解析蔚县剪纸文化景观,建立了包括艺人、生产作坊、文化受众、网络店铺等10种文化载体的空间数据库;通过不同的文化载体整合实现艺人分布空间、艺人行为空间、艺术风格空间、艺术传承空间和产销空间等地图表达成果.地图表达为进一步开展景观格局特征及其驱动机制的挖掘分析奠定了基础.本文是针对文化地理研究方法论的探讨和实证,通过文化景观的抽象语言描述到地图可视化表达,为非物质文化现象的时空研究提供了新模式.李仁杰,傅学庆,张军海 - 人文地理文章来源： 万方数据 -
真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA的构建及其在猪成纤维细胞的表达
α-乳清蛋白(α-lactalbumin,α-LA)是哺乳动物乳汁中一种重要的蛋白质,富含机体必需氨基酸和支链氨基酸,其极佳的氨基酸比例、易吸收性以及功能特异性,使得α-LA在婴幼儿个体正常生长中具有重要的意义.本实验旨在构建人α-乳清蛋白真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA,将其转染至猪(Sus scrofa)的成纤维细胞,获得稳定表达人仪一LA的细胞.根据猪基因密码子偏爱性优化并合成人α-乳清蛋白基因mRNA序列opLA,并将其定向克隆入pIRES2一ZsGreenl真核表达载体,双酶切及测序方法鉴定重组载体;脂质体介导的方法将载体转染入培养的猪成纤维细胞,荧光显微镜下观察转染效果,G418抗性筛选重组细胞;RT-PCR方法检测目的基因的表达.结果表明,通过酶切以及测序鉴定得到的重组载体pIRES2一ZsGreenl-opLA构建成功;荧光显微镜下观察,转染了plRES2-ZsGreenl-opLA和pIRES2一ZsGreenl空载体的细胞均发出绿色荧光,且荧光多集中于细胞核;筛选重组细胞的最小G418浓度为400ng/μL;RT-PCR法检测到与目的基因大小一致的片段,而未转染组和转染空载体组均未检测到.本实验成功构建真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA,并获得稳定表达目的基因的猪成纤维细胞,该细胞可作为进一步研究转基因克隆猪的供体细胞.李艳玲,王颖,党文庆,郝柱,徐宁迎,张金枝 - 农业生物技术学报文章来源： 万方数据 -
基于道德品格存在之争的品格构建及其启示
经典的亚里士多德的品格观遭到了以哈曼和多里斯为首的情境论哲学家的挑战,但他们对于品格的理解存在着过多注重行为的气质性倾向,以至于把行为的气质性倾向等同于品格特质的偏差.而品格的构成,不仅包含着作为品格外在表征的行为气质性倾向,而且还包含道德信念以及道德义务影响行为的气质性倾向的本质和程度等内在因素.因此,品格构建应着力通过自我调控来缩小道德义务与行为的气质性倾向之间的差距.而品格构建的现实启示就是品格的教育需注重外在的行为与内在的道德心理;细微的情境因素都可能影响主体的道德心理和道德行为,导致道德偏差的出现;需要加强对情境的控制,但决不能否认品格的存在.刘胜梅 - 华中科技大学学报(社会科学版)文章来源： 万方数据 -
人Midkine基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
目的:构建人Midkine( MK)基因RNA干扰( RNA interference, RNAi)慢病毒载体并鉴定,为其体内外实验研究提供基础。方法设计针对人MK基因序列的4条RNAi靶点序列,分别与慢病毒载体进行连接,获得GV115-MK-1、GV115-MK-2、GV115-MK-3和GV115-MK-4质粒,转染感受态细菌,经PCR及测序技术的鉴定,然后与pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染293T细胞,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。4种病毒载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,用RT-PCR检测MK mRNA的表达。结果 PCR和测序检测结果证实,插入的MK RNAi核苷酸序列正确,共转染293T细胞后可见大量绿色荧光。浓缩病毒后测定其滴度分别为6×108、5×108、5×108和6×108 TU/ml。感染 MDA-MB-231细胞后, RT-PCR 检测结果表明, GV115-MK-1干扰效果明显,MK基因敲减效率达87.2%( P<0.05)。结论成功构建人MK RNAi慢病毒表达载体,并可有效抑制MDA-MB-231细胞MK基因的表达。王庆苓,张鹏 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
pEGFP-N1-H2B1重组质粒的构建和鉴定
母胎免疫耐受作为天然的同种异体免疫耐受模型,大量研究表明,位于母胎界面的绒毛膜组织不表达经典人类白细胞抗原(HLA)Ⅰa类分子而表达非经典HLAⅠb分子(包括HLA-G等)是母胎耐受的重要机制之一.小鼠的H2B1(blastocyst MHC)基因具有HLA-G结构,其mRNA选择性表达于母胎界面,被认为是HLA-G的同源基因,研究表明blastocyst MHC以H2B1mRNA的形式能有效减栗一帆,梁志伟,姜惠敏 - 山西医药杂志文章来源： 万方数据 -
脂微球载药系统的研究进展
脂微球递药系统是药剂学研究的热点,从脂微球载药系统的形成机制、构建方法及关键影响因素等方面进行综述,介绍该领域研究的进展和一些新发现,以促进脂微球作为药物载体的开发和应用.章秀丽,马月琴,李刚 - 药学实践杂志文章来源： 万方数据 -
论"适度型"文化产业政府规制模式的构建
现代市场经济条件下政府规制失灵的存在,决定了必须合理确定文化产业政府规制的作用边界,遵循适度性规制原则.构建"适度型"文化产业政府规制模式,不能仅从规制内容本身着手,而要将其作为一项系统工程对待,主要从完善文化产业政府规制的法律体系、健全文化产业政府规制的行为主体、重构文化产业经济性规制、改善文化产业社会性规制、推广运用激励性规制等方面加以改革和创新.张秉福 - 理论学刊文章来源： 万方数据 -
CIK细胞在荷瘤鼠体内的肿瘤靶向性与安全性
目的:探讨CIK细胞对肿瘤组织的靶向性及其在荷瘤鼠体内的运行轨迹和对主要脏器的影响。方法分离制备人CIK细胞,采用体外Transwell迁移试验观察CIK细胞对人乳腺癌细胞MDA-MB-435的靶向迁移效应;以该细胞系接种BALB/c裸鼠建立乳腺癌移植瘤模型,尾静脉注射DiI标记的CIK细胞,应用活体成像和病理学检查观察CIK细胞运行轨迹及对主要脏器的影响。结果 CIK细胞在体外培养14~20天时,细胞增殖达到高峰,CD3+CD56+ T细胞的比例也达到最高值。体外Tr-answell迁移实验显示,随着肿瘤细胞上清液浓度的增加,CIK细胞的迁移数量也随之增多。荷瘤裸鼠尾静脉注射DiI标记的CIK细胞后,活体成像显示肿瘤组织24 h开始出现荧光信号,48 h达到最强;HE和免疫组化染色结果显示,注射后6 h肿瘤周围开始聚集CIK细胞,48 h最多,第14天时肿瘤部位仍有CIK细胞存在,各脏器均未发现由CIK细胞导致的病理组织学损伤。结论 CIK细胞在体内外对肿瘤组织均具有靶向性,对正常组织有安全性,可作为一种有潜力的细胞载体应用于肿瘤的靶向治疗。刘霞,胡奇婵,王涛,黄睿,崔静,王丽,杨举伦 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
论工会利益整合-表达及其特点
以现代社会使用的利益整合和利益表达概念对工会利益整合-表达及其特点进行了界定和分析.工会是维护工人利益的组织,对工人的利益进行整合和表达是工会的重要职能,也是工会存在及其发展的基础.作为工会维护工人利益的必要过程和手段,利益整合与利益表达不仅具有主体的同一性,还具有过程的同一性.作为一种组织行为,工会利益整合-表达具有组织化程度高、组织成员数量多、与政党联系紧密等特点.刘勇 - 西北大学学报(哲学社会科学版)文章来源： 万方数据
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