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发芽绿豆生物转化法富集γ-氨基丁酸
应用高效液相色谱法,以异硫氰酸苯酯为衍生化试剂测定发芽绿豆中γ氨基丁酸(GABA)的含量,并对发芽绿豆生物转化法富集GABA的各影响因素进行研究.结果表明:发芽绿豆生物转化反应的最适反应温度为40℃,最适pH为6.0.当谷氨酸钠的浓度为4 mmol/L时,GABA的生成量最高.Ca2+和维生素B6对GABA都具有激活作用,当Ca2+浓度为1.5 mmol/L,维生素B6为1.5 mmol/L时,其激活作用最强,分别为未激活时的1.25倍和1.89倍.在该条件下反应2h较合适,由最初的几乎检测不到GABA,到最终能达到796.8 mg/100g·干基.由于生物酶转化法生产GABA安全,条件温和,无副反应等原因非常适合应用于食品领域.郝文静,张晓鸣,黄汉荣 - 食品与机械文章来源： 万方数据 -
雌激素及雌激素受体α减轻谷氨酸对神经细胞的损伤
目的:建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型,观察雌激素及雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)对谷氨酸诱导的神经细胞损伤的作用.方法:原代培养小鼠大脑皮层神经细胞,神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)免疫组化染色鉴定神经元的纯度.建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型.用前期实验中已构建成功的ERα重组慢病毒(V-ERα-RFP-flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞.实时荧光定量PCR和Western blotting检测ERα mRNA和蛋白表达水平.实验分为3组:(1)对照组:用空慢病毒(V-RFP-flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞;(2)雌激素组:用雌激素干预经谷氨酸诱导的神经细胞;(3)慢病毒组:用V-ERα-RFP-flag感染经谷氨酸诱导的神经细胞.流式细胞术检测各组神经细胞凋亡率;实时荧光定量PCR及免疫荧光染色检测各组神经细胞中N-甲基-D-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1)及囊泡膜谷氨酸转运体蛋白1(vesicular glutamate transporter protein 1,VGLUT1)的变化.结果:成功原代培养神经细胞,经NSE免疫组化方法鉴定神经元纯度大于90%.成功建立经谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型.MOI=7的V-ERα-RFP-flag感染神经细胞72 h后,在荧光显微镜观察下可见到红色荧光表达,与对照病毒相比,能增加神经细胞中ERα mRNA和蛋白表达水平(P<0.01).与对照组相比,雌激素组和慢病毒组细胞凋亡率降低(P<0.05),且实时荧光定量PCR结果显示,雌激素组和慢病毒组的NMDAR1和VGLUT1 mRNA表达降低(P<0.05),免疫荧光实验结果提示NMDAR1和VGLUT1阳性的细胞数减少(P<0.01).结论:雌激素和ERα能减轻谷氨酸对神经细胞的损伤效应,该保护作用可能通过抑制NMDAR1和VGLUT1的表达来实现.朱加应,张广云,王建怡,袁平,胡晓 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
亚低温预处理对谷氨酸诱导原代大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用
目的 观察亚低温预处理对体外环境下培养大鼠大脑皮质细胞发生类缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用;比较亚低温单用或联合药物预处理的保护作用.方法 选择出生24 h内SD大鼠的大脑皮质细胞,体外培养至第3天,用阿糖胞苷(2.5 mg/L)培养基换液1次;培养6d后随机分为空白对照组、谷氨酸损伤组(加入含200 μmol/L谷氨酸的无血清培养基作用0.5 h)、亚低温预处理组(谷氨酸损伤前1d于33.5℃低温下培养24 h)、亚低温联合依达拉奉预处理组和亚低温联合丙泊酚预处理组(谷氨酸损伤前1d分别更换为100 μmol/L依达拉奉培养基和3 mg/L丙泊酚培养基后,再低温培养24 h).各组更换正常培养基24 h后检测细胞存活率[四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法]、细胞凋亡率、c-fos蛋白表达,苏木素-伊红(HE)染色后显微镜下观察细胞形态改变,铀-铅染色后透射电镜下观察细胞超微结构改变.结果 谷氨酸损伤组细胞存活率明显低于空白对照组[(0.20±0.02)%比(0.97±0.03)%,P<0.01],细胞凋亡率和c-fos蛋白表达均明显高于空白对照组[细胞凋亡率:(9.85±0.76)%比(0.94±0.20)%,c-fos(ng/L):6.96±0.75比1.65±0.59,均P<0.01].亚低温预处理可明显逆转谷氨酸损伤细胞的存活率、凋亡率及c-fos水平,且以亚低温联合丙泊酚预处理作用最为明显[存活率:(0.80±0.04)%比(0.20±0.02)%,凋亡率:(2.26±0.54)%比(9.85±0.76)%,c-fos(ng/L):2.98±0.46比6.96±0.75,均P<0.01].显微镜下观察细胞形态发现,空白对照组大部分细胞形态大致正常;谷氨酸损伤组较多细胞质呈深红色,核呈蓝黑色,同缩状态,轴突萎缩明显,个别细胞突起断裂,细胞数量锐减;各预处理组细胞数量减少不明显,可见少量凋亡细胞.透射电镜下观察细胞超微结构发现,空白对照组神经细胞超微结构无明显改变;谷氨酸损伤组细胞质内细胞器数量明显减少,线粒体严重肿胀、嵴消失,呈空泡化或固缩,粗面内质网严重扩张,核膜局部出现囊样改变、甚至溶解断裂,染色质浓缩、凝集在核膜周边;各预处理组病理改变较谷氨酸损伤组明显减轻.结论 亚低温预处理能降低体外培养谷氨酸对大鼠大脑皮质神经细胞的损伤,且亚低温联合丙泊酚预处理组的保护作用更好.薄丰山,王迪芬,刘文悦,付江泉 - 中华危重病急救医学文章来源： 万方数据 -
谷氨酰胺对大鼠肠缺血再灌注损伤的作用
目的:探讨谷氨酰胺对大鼠缺血再灌注肠黏膜的作用及其可能机制。方法:成年雄性Wistar大鼠30只随机分为假手术组( sham组)、缺血再灌注损伤组( I/R组)和谷氨酰胺治疗组( Gln组)。 Gln组给予谷氨酰胺1 g· kg-1· d-1连续灌胃7 d。 Sham 组和I/R组以同等剂量生理盐水灌胃7 d。 Sham 组仅分离肠系膜上动脉( SMA)而不夹闭根部。 I/R组和Gln组均用无损伤血管夹夹闭SMA根部,30 min后放松血管夹形成再灌注损伤模型。各组大鼠均于制模后24 h采集静脉血和回肠标本。检测血清D-乳酸、内毒素、超氧化物歧化酶( SOD )和丙二醛( MDA)水平,HE染色法观察肠组织病理损伤情况。结果:I/R组的D-乳酸、内毒素、MDA水平和Chiu's病理评分均高于sham组和Gln组(P<0.05),血清SOD活力均低于sham组和Gln组(P<0.05)。结论:谷氨酰胺对缺血再灌注损伤的肠黏膜屏障具有保护作用,其机制可能与抗氧化应激反应有关。王爱丽,牛琼,刘成霞,贾兴芳,连海峰 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
HPLC法同时测定人血清中犬尿氨酸和色氨酸的浓度
目的:建立同时测定人血清中的犬尿氨酸和色氨酸浓度的方法.方法:血清样品用24%高氯酸以10:1进行蛋白沉淀处理,取上清液进样分析.采用高效液相色谱-紫外/荧光检测器法分别检测犬尿氨酸和色氨酸浓度,色谱柱为Accurasil-C18,流动相为乙酸钠-乙腈溶液(24.8mmol.L-1乙酸钠,用乙酸调pH值至约4.0)=90:10,流速1.0mL.min-1,紫外检测波长为360nm,荧光检测激发波长为285nm、发射波长为365nm.结果:犬尿氨酸、色氨酸血药浓度分别在0.16~20.89(r=0.9999)、0.24~61.58μmol.L-1(r=0.9996)范围线性关系良好;高、中、低3种浓度的方法回收率分别为91.33%~101.82%、91.49%~104.37%;日内及日间RSD均唐婕,陈蓉,缪丽燕 - 中国药房文章来源： 万方数据 -
体温控制对重型颅脑损伤患者脑脊液中caspase-3、caspase-9及预后的影响
目的 探讨体温控制对重型颅脑损伤患者神经细胞凋亡及预后的影响. 方法 将42例重型颅脑损伤患者随机分为两组:实验组(n=22)患者采用亚低温治疗仪将患者急性期7d内的肛温持续控制在36℃ ~37℃;对照组(n=20)未控制体温,当体温超38℃时予常规方法降低体温.收集患者入院后第1、3、5、7d的脑脊液标本,比较两组患者脑脊液中caspase-3、caspase-9的浓度及预后的差异. 结果 ①组间比较,caspase-3及caspase-9的浓度值均在第1d无统计学差异(P>0.05);实验组第3、5及7d浓度均低于对照组(P<0.05).②根据伤后3~6个月GOS评分,实验组患者预后良好率高于对照组(P<0.05). 结论 体温控制在36℃~37℃可降低重型颅脑损伤患者脑脊液中caspase-3及caspase-9的浓度,降低预后不良的发生率,改善患者的预后.袁辉纯,徐立新,刘志雄,贾若飞,阙思伟,冷海斌,王俊,梅涛 - 中国现代手术学杂志文章来源： 万方数据 -
转录因子 ZFP580在缺氧预处理抗大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用
目的:通过观察缺氧预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及锌指核转录因子ZFP580表达的改变,探讨ZFP580的作用及机制。方法:培养大鼠H9c2心肌细胞,分为3组:(1)缺氧/复氧(H/R)组:H9c2心肌细胞换用模拟缺血溶液(pH=6.2)缺氧(95%N2+5%CO2)培养3 h,复氧培养2 h;(2)缺氧预适应(HPC)组:H9c2心肌细胞经3个循环的短暂缺氧(10 min)/复氧(20 min)处理后,进行同上H/R实验;(3)对照(C)组:正常培养的H9c2心肌细胞。通过MTT染色及LDH水平判定HPC的作用。 Western blotting方法观察心肌细胞中转录因子ZFP580表达及ERK1/2磷酸化情况,以及ERK1/2磷酸化抑制剂PD98059对ZFP580表达的影响。分别构建高/低表达ZFP580的慢病毒载体并转染H9c2心肌细胞,经H/R实验后利用Annexin V-PE/7-AAD染色及流式细胞术检测H9c2细胞凋亡情况,Western bloting方法观察caspase-3活化情况。结果: HPC能显著改善H/R处理后H9c2心肌细胞存活率降低和LDH漏出的现象。 Western blotting 结果显示,HPC组心肌细胞中ZFP580表达及ERK1/2磷酸化程度较H/R处理组明显上升,且PD98059预处理明显抑制HPC诱导的ZFP580的表达上调。慢病毒介导的基因转染实验发现,ZFP580高表达的H9c2心肌细胞在H/R损伤后凋亡率降低且细胞中活化caspase-3表达下降。结论:HPC可引起心肌细胞中转录因子ZFP580表达上调,ZFP580作为ERK1/2通路的下游靶分子发挥抗心肌细胞凋亡的作用。 ZFP580表达上调可能作为内源性保护机制之一介导了HPC的细胞保护作用。孟祥艳,于海龙,买霞,张文成,徐瑞成 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
苦参碱对人髓母细胞瘤 D341细胞凋亡及相关蛋白表达的影响
目的:探讨苦参碱在体外对人髓母细胞瘤D341细胞凋亡及Bax、Bcl-2、丝氨酸/苏氨酸激酶Akt和磷酸化Akt(p-Akt)表达的影响。方法:体外培养的D341细胞分为实验组(加不同浓度的苦参碱)和对照组(不加苦参碱),用CCK-8法检测苦参碱对D341细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot-ting检测苦参碱对D341细胞Bax、Bcl-2、Akt和p-Akt蛋白表达的影响。结果:苦参碱在体外能明显地抑制D341细胞的生长,作用呈量效与时效关系;随着作用药物浓度的增高和作用时间的延长,其凋亡率逐渐升高,在透射电镜下观察,细胞可见染色质趋边固缩,胞浆中空泡增多、变大,并且出现凋亡小体;Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加,药物能使瘤细胞Bax蛋白的表达水平增强,却使Bcl-2和p-Akt蛋白的表达水平下降。结论:苦参碱可诱导D341细胞的凋亡而发挥体外抗肿瘤作用,其诱导瘤细胞的凋亡与上调Bax蛋白、下调Bcl-2及PI3K /Akt信号通路中p-Akt蛋白的表达水平有关。周开宇,毛天明,陈茜,罗永康 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
同型半胱氨酸在脑梗死患者中的表达及叶酸对其影响的研究
近年来随着我国人口老龄化的到来及人们生活水平的提高、生活方式的改变,脑梗死的发病率越来越高,是造成人类死亡及致残的重要原因之一,给社会及家庭带来沉重的经济及心理负担.大量研究表明同型半胱氨酸(Hcy)是脑梗死的重要独立危险因苗青,杨菲,戚静 - 临床荟萃文章来源： 万方数据 -
靶向 caspase-8小发夹 RNA 减轻去血清/缺氧诱导的人骨髓间充质干细胞凋亡
目的:研究caspase-8小发夹RNA(Cap8 shRNA)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)凋亡的调控作用。方法:构建2个靶向人caspase-8基因的穿梭质粒pAd-Cap8 shRNA,并鉴定可有效抑制人HEK293细胞中caspase-8表达的pAd-Cap8 shRNA质粒。构建表达Cap8 shRNA的重组腺病毒质粒,并在HEK293细胞中包装、扩增重组腺病毒rAd-Cap8 shRNA。检测rAd-Cap8 shRNA感染的hMSCs中caspase-8 mRNA和蛋白表达。利用anne-xin V/PI双染色法和caspase-8活性检测分析去血清/缺氧诱导的hMSCs凋亡变化,利用荧光定量PCR检测hMSCs中VEGF、肝细胞生长因子1(HGF)、胰岛素样生长因子(IGF-1)、Bcl-2和Bcl-xL mRNA表达。结果:通过定量PCR筛选到可有效抑制caspase-8表达的pAd-Cap8 shRNA质粒。成功构建Cap8 shRNA的重组腺病毒质粒,并包装、扩增重组腺病毒rAd-Cap8 shRNA。荧光定量PCR和Western blotting结果证实rAd-Cap8 shRNA可有效抑制hMSCs中caspase-8表达。 rAd-Cap8 shRNA能有效抑制去血清/缺氧诱导的hMSCs凋亡,降低caspase-8活性,增强hMSCs中HGF、IGF-1和Bcl-2表达。结论:Caspase-8 shRNA可以抑制去血清/缺氧诱导的hMSCs凋亡。袁伟伟,林秋雄,朱杰宁,李晓红,符永恒,刘晓颖,谭虹虹,邓春玉,单志新 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据
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