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中心组合设计法优化载基因壳聚糖纳米粒的最佳转染制备区域

目的采用中心组合设计法优化载基因壳聚糖纳米粒的最佳转染制备区域.方法采用复凝聚法制备载质粒基因的壳聚糖纳米粒,选择壳聚糖浓度和质粒基因浓度作为实验考察因素,应用两因素五水平中心组合设计优化最佳转染制备区域,优化指标选择平均粒径和基因转染率.通过透射电镜观察纳米粒的形态;通过动态光散射和电泳光散射技术分别测量纳米粒的粒径和Zeta电位;通过凝胶电泳分析考察质粒在纳米粒制备过程中的稳定性;通过倒置荧光显微镜观察质粒基因在细胞内的表达;通过流式细胞技术测定纳米粒的转染效率.结果成功优化了载基因壳聚糖纳米粒的最佳转染制备区域.优选条件下制备的纳米粒大多呈球形,纳米粒平均粒径为217.6 nm,粒径多分散系数为0.241,表明粒径分布较窄.纳米粒zeta电位为+22.4 m V,表明纳米粒表面带有正电荷,可以增加纳米粒混悬液的稳定性.凝胶电泳分析结果表明质粒基因在纳米粒制备过程中没有遭到破坏.纳米粒的细胞转染效率比较高,能够高效地将绿色荧光蛋白质粒基因递送到细胞内,并且基因表达产生绿色荧光蛋白.结论本研究建立的数学模型具有良好的预测性.在优化的制备区域内制备的载基因壳聚糖纳米粒的转染性能比较理想.

邵帅,崔光华,周旭,高钟镐,黄伟 - 药学实践杂志

文章来源：万方数据

Has-miR-339-5p对裸小鼠人乳腺癌移植瘤形成及生长的影响

目的建立miR-339-5p的稳定转染细胞系并探讨其在小鼠体内的成瘤性.方法用Lipofectamine 2000介导的转染法将含miR-339-5p片段的质粒转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,以空载体作为阴性对照.并用G418作为筛选用药建立稳定转染细胞系.皮下原位接种癌细胞观察其对乳腺癌的形成及生长的影响.结果 RT-PCR技术检测稳定转染细胞系miR-339-5p miRNA的表达,与阴性对照组相比,其表达明显上调;接种miR-339-5p稳定转染细胞系组小鼠形成乳腺癌的时间明显迟于阴性对照组,且肿瘤生长较慢.结论 miR-339-5p可降低体内乳腺癌细胞的生长繁殖能力,有望成为乳腺癌治疗的潜在新靶点.

聂静,吴正升,朱敬凤,黄山,吴强 - 临床与实验病理学杂志

文章来源：万方数据

微小RNA-294靶向抑制髓系细胞触发受体-1对脓毒症炎症因子的影响

目的探讨微小RNA-294(miR-294)靶向抑制髓系细胞触发受体-1(TREM-1)对脓毒症肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的影响.方法利用生物信息学预测miR-294可能靶向调控TREM-1基因.体外培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,分成非炎症期和炎症期,每期各分为细胞对照组(NC组)、NC拟似物(mimic)和抑制剂(inhibitor)转染组(NCm组、NCi组)、miR-294 mimic和inhibitor转染组(miR-294m组、miR-294i组)5组.用双荧光素酶报告基因系统进行功能验证.以TurboFectTM小干扰RNA转染细胞48 h(非炎症期)后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞TREM-1 mRNA表达;以1 mg/L内毒素处理6h后(炎症期)收集上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-α、IL-6、HMGB1浓度;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测TREM-1蛋白表达.结果 ①双荧光素酶报告基因系统证实TREM-1是miR-294的靶点.②非炎症期:miR-294m组TREM-1 mRNA表达(2-△△Ct)较NC组、NCm组明显降低(0.673±0.049比1.000±0.003、0.915±0.039,f1=2.184、t2=5.421,均P<0.001);miR-294m组TREM-1蛋白表达(灰度值)为NCm组的(50.00±1.19)%(t=41.586,P<0.001).③炎症期:miR-294m组TNF-α(ng/L)较NC组明显降低(1 547.18±47.18比2 702.11±327.20,t=4.212,P=0.010),IL-6(ng/L)较NC组、NCm组明显降低(505.28±33.33比837.66±69.43、918.72±119.39,t1=4.382、P1=0.015,t2=5.451、P2=0.021);TREM-1蛋白表达(灰度值)为NCm组的(51.33±0.88)%(t=63.368,P<0.001);各组HMGB1比较均无差异.结论 miR-294能靶向抑制TREM-1表达,减少内毒素诱导的小鼠巨噬细胞株RAW264.7分泌TNF-α和IL-6.

刘奕君,曹殿青,莫桂熙,张良清 - 中华危重病急救医学

文章来源：万方数据

真核表达载体pIRES2-EGFP-AMH的构建及鉴定

目的构建人AMH基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-AMH.方法从COV434细胞中获取AMH基因片段,经EcoRI、BglII双酶切定向克隆至载体pIRES2-EGFP,构建pIRES2-EGFP-AMH.经双酶切和测序鉴定后转染COV434细胞,通过荧光定量PCR和细胞免疫荧光技术检测AMH基因的表达变化.结果重组人AMH真核表达质粒经酶切和测序鉴定正确,转染后能显著提高AMH mRNA和蛋白的表达.结论人AMH真核表达载体构建成功,为进一步研究人AMH基因的功能提供初步的实验基础.

严丽丽,胡蓉,李娟,王飞苗 - 宁夏医学杂志

文章来源：万方数据

基于DEA模型的群众体育财政投入绩效分析

选取我国大陆除西藏以外30个省(自治区、直辖市)作为样本,考虑群众体育财政投入产出时滞性,运用数据包络分析方法的CCR、BCC和 SE-DEA模型对2011年我国地方群众体育财政投入效率进行了分析评价。结果显示:1)我国地方群众体育财政投入效率普遍较低,只有5个省(自治区、直辖市)达到DEA完全有效,全国综合效率的均值只有0.6666;2)效率标准差为0.2650,表明各地区群众体育财政投入效率存在较大的差异;3)从综合效率分解来看,不同地区影响综合效率的原因不同,有的是群众体育财政投入规模的问题,有的是群众体育财政投入管理的问题;4)超效率模型使地区群众体育财政投入效率差异更加明显化,江苏效率值最高。提出不同地区要采取不同群众体育财政投入对策、不断加大群众体育财政投入力度、加强群众体育财政管理、建立健全群众体育财政投入绩效评价等政策建议。

邵伟钰 - 体育科学

文章来源：万方数据

面向能耗效率优化的CoMP系统频谱效率性能分析

CoMP技术可以有效的降低无线通信系统能耗,提高系统能耗效率.针对现有利用Co MP技术提升能耗效率的研究中忽视频谱效率的问题,对提升能耗效率过程中的频谱效率变化趋势进行了分析及仿真验证,并对该场景下能耗效率与频谱效率变化趋势的关系进行了分析.仿真验证表明,通过CICA方式提高系统能耗效率是以牺牲系统的频谱效率为代价的,但当Co MP的区域占所有区域的比例为35%或参与Co MP的基站数量设置为4时,单位频谱效率对提高能耗效率的贡献接近极限.

刘子辰,张玉成,胡金龙,周一青,石晶林 - 系统仿真学报

文章来源：万方数据

MUC1 mRNA 体外负载树突状细胞诱导细胞毒性T 细胞对非小细胞肺癌的杀伤作用

目的:将体外扩增的黏蛋白1( MUC1) mRNA转染入成熟的树突状细胞( DCs ),观察其体外诱导的特异性抗肿瘤效应。方法:将分离提纯的单核细胞培养诱导为DC并用流式细胞术鉴定。构建pcDNA3.1(+)-MUC1质粒,体外转录为mRNA,电穿孔法转染DCs。定量PCR检测转染的DCs中MUC1的表达;MTT法检测T细胞增殖情况;流式细胞术检测CD8+在T细胞的表达;LDH释放法测定细胞毒性,ELISA检测IFN-γ分泌水平。结果:流式细胞术结果表明成熟DCs标志表型的表达明显高于对照组。定量PCR结果说明转染后的DCs MUC1 mR-NA相对表达量增高。转染组DCs与T细胞按1∶10共培养时,刺激增殖能力明显高于未转染组,且CD8+T细胞表达率高于未转染组,诱导产生特异性的细胞毒性T细胞杀伤表达MUC1蛋白的靶细胞,而未转染组的杀伤作用较弱。转染组DCs与T细胞共培养的上清中IFN-γ的分泌水平高于未转染组。结论:电穿孔法可以将MUC1 mRNA成功转染至DCs,产生特异性杀伤效应,为以MUC1为靶点的非小细胞肺癌的免疫治疗提供实验和理论依据。

巴俊慧,吴本权,王艳红,刘慧,杨洋,石云锋,罗进梅,张天托 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

食品样品密度差异对HPGeγ谱仪测量结果的影响

样品与标准源质量密度往往不一致.添加等量的放射性核素^232Th,制备6个密度梯次分布的食品样品,用高纯锗(HPGe)γ谱仪对.勉Th子体各谱线分别进行能谱分析,用全能峰面积净计数率比计算样品的相对自吸收校正系数.再用无源效率刻度软件Gammaclib对这6个密度样品进行建模仿真,拟合出各谱线效率,用效率比计算样品的相对白吸收校正系数.两种方法结果表明,食品样品与标准源的密度差异会对实验结果产生影响,需要进行自吸收校正.

万永亮,铁列克,朱侠,刘默寒,刘金豪 - 核技术

文章来源：万方数据

人类mtDNA D-Loop区位点变异对基因表达的影响

Case-Control研究表明,人线粒体基因(mtDNA) D-Loop区mt235、mt514-515、mt16183、mt16290和mt16319多态位点与有氧运动能力有关.拟从下游基因表达做进一步的研究,以探讨上述多态位点的分子调控机理.方法:采用全基因组合成法合成包含上述多态位点的DNA序列,分别连接到pGL3-promoter载体构建重组质粒,将重组质粒转染至293T细胞,观察携带5对mtDNA质粒对下游双荧光素酶报告基因的表达及荧光素酶mR-NA表达的影响.结果:携带mt235A、mt514-515CA、mt16183A和mt16319G的载体转染细胞的双荧光素酶基因表达量显著高于mt235G、mt514-515Del、mt16183C和mt16319A(P<0.01);携带mt16290两种基因型的质粒转染细胞报告基因表达没有明显差异.与pGL3-promoter载体相比,携带mt16319A的质粒转染细胞荧光素酶mRNA极显著下降(P<0.01),携带mt16290位点的两种质粒对报告基因mRNA的影响没有差异.结论:mt235、mt514-515、mt16183和mt16319多态位点影响荧光素酶基因表达,mt235A、mt514-515CA和mt16183A上调基因转录和翻译,mt16319A下调基因转录.这些基因表达上的差异可能是影响人有氧运动能力的重要调控因素.

龚丽景,胡扬,李燕春,梅涛 - 体育科学

文章来源：万方数据

慢病毒介导环腺苷酸反应成分结合蛋白1特异性小干扰RNA对小鼠视网膜新生血管的抑制作用

目的观察玻璃体腔注射慢病毒介导环腺苷酸反应成分结合蛋白1(CREB1)特异性小干扰RNA(siRNA)对小鼠视网膜新生血管的抑制作用.方法构建针对小鼠靶基因CREB1 siRNA载体,筛选并进行慢病毒包装.将140只C57BL/6J小鼠均分为正常对照组、氧诱导视网膜病变(OIR)模型组、空载体组和CREB1干扰组.正常对照组小鼠在正常空气中饲养.OIR模型组、空载体组和CREB1干扰组小鼠均于出生后7d建立OIR模型.空载体组及CREB1干扰组小鼠于出生后5d分别行玻璃体腔注射慢病毒-绿色荧光蛋白(GFP)空载体和CREB1-RNA干扰慢病毒载体1.0μl.利用突破内界膜的新生血管内皮细胞核数和荧光血管造影视网膜铺片评价视网膜新生血管情况;计算小鼠视网膜新生血管和无灌注区面积;逆转录聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法检测小鼠视网膜CREB1 mRNA和磷酸化CREB1 (P-REB1)蛋白表达,以及血管内皮生长因子(VEGF)-A、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的mRNA和蛋白表达情况.结果 OIR模型组、空载体组突破内界膜的血管内皮细胞核计数较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);CREB1干扰组突破内界膜的血管内皮细胞核计数较OIR模型组、空载体组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05).OIR模型组、空载体组小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积均较正常对照组明显增大,CREB1干扰组小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积均较OIR模型组和空载体组明显缩小.4组小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积比较,差异均有统计学意义(F=67.220、110.090,P<0.05).OIR模型组、空载体组小鼠视网膜CREB1 mRNA和P-CREB蛋白表达以及VEGF-A、Akt、PI3K mRNA和蛋白表达均较正常对照组明显增加;CREB1干扰组小鼠视网膜CREB1 mRNA和P-CREB蛋白表达以及VEGF-A、Akt、PI3K mRNA和蛋白表达较OIR模型组、空载体组明显下降.4组小鼠视网膜CREB1、VEGF-A、Akt、PI3K mRNA表达比较,差异均有统计学意义(F-6.087、5.464、6.191、8.627,P<0.05).4组小鼠视网膜P-CREB1、VEGF-A、Akt、PI3K蛋白表达比较,差异也有统计学意义(F=162.944、13.861、19.710、22.827,P<0.05).结论玻璃体腔注射慢病毒介导的CREB1 siRNA转染视网膜可有效抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管的形成.

温臣婷,贺涛,邢怡桥,焦康为,蔡维 - 中华眼底病杂志

文章来源：万方数据