-
qRT-PCR检测石蜡包埋组织microRNA的研究进展
实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRTPCR)是一种具有高度敏感性和特异性的核酸定量分析技术,因其具有重复性好、定量准确等优点,已成为核酸检测的重要方法.microRNA是核酸家族中的重要成员,可使用qRT-PCR技术进行检测.由于microRNA具有其特殊性,与mRNA的检测方法不完全一样,仍需进行深入探讨qRT-PCR技术分析组织中microRNA的表达方式.现就该方面的研究进展作一综述.程凯,余波,王建东,石群立 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
应用PCR-DHPLC技术高通量快速检测转基因玉米
利用多重PCR结合DHPLC技术首次建立转基因玉米高通量快速检测方法.根据公布的转基因玉米外源基因序列设计并合成适合多重PCR的引物序列,以转基因玉米为模板,通过优化多重PCR和DHPLC的反应条件,建立一套同时快速筛选检测玉米中多种转基因成分的7重PCR-DHPLC检测方法.该方法的检测灵敏度为0.195 ng/μL,质粒检测灵敏度为1*103拷贝/μL.吴静,李铁柱,孙瑶,孙方达,栾凤侠,赵明超 - 玉米科学文章来源： 万方数据 -
茎一环RT-PCR法定量miRNA-421的引物设计
本研究旨在通过茎一环RT-PCR法,建立有效定量miRNA421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-d21,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎一环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎一环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点.赵丽,杨洋,温传俊 - 南京师大学报(自然科学版)文章来源： 万方数据 -
柑橘花器和种子中黄龙病菌的定量分布及应用
为准确、快速测定感病柑橘花器和种子中黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,Las)的含量,比较了SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(SGI-qPCR)和单管双引物对TaqMan探针qPCR(STDP-qPCR)的检测灵敏度,并用STDP-qPCR法定量检测了感病沙田柚花器和种子中的Las.结果显示,STDP-qPCR检测灵敏度为1*100拷贝/μL,比SGI-qPCR高100倍;花器中的雄蕊、花瓣、雌蕊和花粉等组织,以及种子的种皮和胚乳组织中均可检测到Las,但含量差异较大,其中种皮组织中Las含量最高,达到109842个细胞/μg DNA,花粉中的Las含量最低,为308个细胞/μg DNA,所有种壳中均未检测到Las;基于雄蕊组织的黄龙病分子诊断准确率达93.8%.表明Las在感病柑橘花器和种子中呈不均匀分布,基于雄蕊组织的黄龙病诊断方法可辅助用于该病害的高通量检测.娄兵海,宋雅琴,赵小龙,白先进,邓崇岭 - 植物保护学报文章来源： 万方数据 -
荧光定量PCR检测石蜡组织中结核分枝杆菌
目的 改进石蜡组织的处理,提高结核分枝杆菌在石蜡组织中检测的敏感性.方法 选择荧光定量PCR检测石蜡组织结核分枝杆菌检测结果为临界值的蜡块标本,行HE染色、抗酸染色及荧光定量PCR石蜡组织结核分枝杆菌DNA检测.通过对其石蜡组织少修片、混合多个蜡块、选择干酪样坏死及肉芽肿病变较多的蜡块以及适量增加模板量的多种方法,对比其在荧光定量PCR法中的检出率.结果 各实验组Ct值减小,扩增曲线均有不同程度的升高.结论 改进操作措施后可以提高蜡块中结核分支杆菌检测的敏感度.杨长绍,王丽,潘鑫艳,王力,黎贵芸,杨举伦 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
关于缩略语使用的要求
文中尽量少用缩略语.已被公知公认的缩略语可以不加注释直接使用.例如:DNA、RNA、HBsAg、PCR等.不常用的、尚未被公知公认的缩略语以及原词过长、在文中多次出现者,若为中文可于文中第一次出现时写出全称,在圆括号内写出缩略语;若为外文可于文中第一次出现时写出中文全称,在圆括号内写出其外文缩略语.- 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据 -
检测伪狂犬病毒gB基因荧光定量PCR方法的建立
利用DNAMAN软件对GenBank登录的伪狂犬病病毒(PRV)各毒株gB基因序列进行比对分析,选择其保守区域设计合成特异性的引物和TaqMan探针,同时利用普通PCR技术扩增获得全长的伪狂犬病毒gB基因,并克隆到pMD20-T载体上作为阳性标准品.通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了一种快速检测伪狂犬病病毒的荧光定量PCR技术.该检测技术具有较高的灵敏性、特异性和可靠性.对制备的pMD-gB阳性标准品的检测结果表明,所建立的伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR最低检测极限可达1.50*102拷贝/反应;同时相比于普通PCR方法其灵敏度高100~1 000倍以上,并且重复性好.在对60份临床样品的检测中,荧光定量PCR不仅检出了普通PCR检测为阳性的样品,且检出了2份普通PCR未检出的样品,进一步证实了该方法快速、灵敏性好,可用于PRV感染的早期快速定量检测和肉类食品进出口检疫.朱淑芬,朱瑞良,乔彩霞,高志强,张利峰,张鹤晓,吴亚琼,王慧珊 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
qRT-PCR检测斯氏并殖吸虫不同虫期PsMt01基因表达研究
建立实时荧光定量qRT-PCR 方法检测斯氏并殖吸虫不同虫期免疫诊断相关的虫体蛋白 PsMt 01 mRNA的表达,探讨其生物学功能。采用Trizol方法提取虫卵、囊蚴、幼虫、童虫、成虫的总RNA,将其反转录为cDNA,以qRT-PCR方法检测PsMt 01 mRNA的变化。研究表明, PsMt 01 mRNA的表达随发育进程呈现逐步升高,在0~7周的幼虫期(42.56±0.35)和童虫期(44.12±0.56)达到峰值。因此推断PsMt 01蛋白在虫体发育的早期发挥着重要作用,可能与免疫逃避和组织迁移等活动相关。宋蓓,康熙雄,牛靖萱,王英,张锡林 - 寄生虫与医学昆虫学报文章来源： 万方数据 -
牦牛脂肪型脂肪酸结合蛋白基因(A-FABP)多态性分析
脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)属脂肪酸结合蛋白家族(FABPs)成员,参与调节哺乳动物细胞内脂肪浓度,进而影响肌肉内脂肪含量(IMF),因此A-FABP可作为影响IMF的候选基因.本研究采用PCR-SSCP技术检测甘南牦牛、青海牦牛、天祝白牦牛(Bos grunniens)A-FABP基因部分第3内含子、第4外显子及部分3'-UTR区单核苷酸多态性( SNPs),分析检测区域分子遗传特征.结果表明,3类群牦牛引物扩增区域发现5种等位基因A-E;同普通牛A-FABP基因序列比对发现6处SNPs,其中第4外显子区存在c.4222A>G的同义突变;3'-UTR区c.* 94T>A只存在于牦牛群体,是其区别于普通牛的遗传特征之一.各等位基因在群体间分布差异较大,其中天祝白牦牛只发现3种等位基因,而青海牦牛发现4种等位基因,这可能与牦牛类群的地域分布及选育程度有关.3类群牦牛A-FABP基因检测位点表现为中度多态(PIC为0.29 ~0.36),有效等位基因数较高,可作为潜在的牦牛肉质性状分子标记位点.曹健,罗玉柱,胡江,成述儒,杨果,刘秀 - 华北农学报文章来源： 万方数据 -
伊玛替尼治疗胃肠道间质瘤耐药相关miRNA的初步筛选
目的 探讨与胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)耐药相关的微小RNA(miRNA).方法 收集4例伊玛替尼耐药GIST和3例恶性GIST,运用Agilent人miRNA寡核苷酸基因芯片V3.0(955个已知miRNA)进行检测,选取耐药组与恶性组间3个差异表达最明显的miRNA,再应用RT-PCR技术在21个扩大样本中验证基因芯片筛选的结果.结果 耐药组与恶性组相差倍数2倍以上(P<0.05),差异表达的miRNA有13个,上调者5个,下调者8个.其中差异最明显的3个分别为miR-15a、miR-1280、miR-320a,前者在耐药组中上调,后两者下调.RT-PCR技术在扩大样本中验证后发现miR-320a在两组中的差异与基因芯片的结果基本相符.结论 通过miRNA芯片初步筛选和在扩大样本中的验证,发现miR-320a在耐药组与恶性组之间表达差异有显著性,提示miR-320a可能与GIST在甲磺酸伊玛替尼治疗过程中的耐药性有关.石园,王翠众,侯英勇,何德明,沈坤堂,谭云山 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据
科创中国
