科创中国

目的:构建表达人LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)基因的腺病毒重组体,体外感染骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)细胞系U2OS,并鉴定LMP-1基因在U2OS中的表达.方法:以K562细胞的cDNA为文库,采用PCR方法对LMP-1进行扩增,通过TA克隆与pGEM-T载体连接并DNA测序.双酶切后并将目的基因插入至腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,对腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1行双酶切和DNA测序鉴定,并通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测pAdtrack-CMV-LMP-1在HEK-293T细胞中的表达.线性化pAdtrack-CMV-LMP-1,在BJ5183菌内完成与骨架质粒pAdeasy-1的同源重组,构建重组腺病毒质粒Ad-LMP-1.通过脂质体介导,在HEK-293A细胞内包装出复制缺陷的重组腺病毒Ad-LMP-1,大量扩增、纯化并测定滴度.用Ad-LMP-1感染OS细胞系U2OS,通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测LMP-1在U2OS细胞中的表达.结果:双酶切和DNA测序鉴定穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1构建成功,荧光显微镜证实转染了pAdtrack-CMV-LMP-1质粒的HEK-293T细胞内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot验证了LMP-1基因的表达量明显高于对照组.通过扩增、纯化,Ad-LMP-1滴度达到1.5*109pfu/ml.荧光显微镜下观察重组腺病毒感染的U2OS内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot检测发现重组腺病毒感染U2OS后,LMP-1的mRNA和蛋白表达量明显高于对照组.结论:成功构建了人LMP-1基因腺病毒重组体,为进一步的实验研究奠定了基础.

Computer-based conceptual design for routine design has made great strides, yet non-routine design has not been given due attention, and it is still poorly automated. Considering that the function-behavior-structure(FBS) model is widely used for modeling the conceptual design process, a computer-based creativity enhanced conceptual design model(CECD) for non-routine design of mechanical systems is presented. In the model, the leaf functions in the FBS model are decomposed into and represented with fine-grain basic operation actions(BOA), and the corresponding BOA set in the function domain is then constructed. Choosing building blocks from the database, and expressing their multiple functions with BOAs, the BOA set in the structure domain is formed. Through rule-based dynamic partition of the BOA set in the function domain, many variants of regenerated functional schemes are generated. For enhancing the capability to introduce new design variables into the conceptual design process, and dig out more innovative physical structure schemes, the indirect function-structure matching strategy based on reconstructing the combined structure schemes is adopted. By adjusting the tightness of the partition rules and the granularity of the divided BOA subsets, and making full use of the main function and secondary functions of each basic structure in the process of reconstructing of the physical structures, new design variables and variants are introduced into the physical structure scheme reconstructing process, and a great number of simpler physical structure schemes to accomplish the overall function organically are figured out. The creativity enhanced conceptual design model presented has a dominant capability in introducing new deign variables in function domain and digging out simpler physical structures to accomplish the overall function, therefore it can be utilized to solve non-routine conceptual design problem.

甲状腺激素应答基因(thyroid hormone responsive SPOTl4,THR5P)是受甲状腺激素诱导表达的核内基因,参与脂肪合成代谢途径限速酶的转录调控,对动物脂肪生成具有重要的调控作用.为进一步研究猪SPOTl4基因所编码蛋白质的生物学功能,本实验将猪SPOTl4(GenBank登录号:JF951726)的ORF片段与表达载体pET一280ff+)进行重组,获得的重组子pET一280ff+).S14,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)感受态细胞,重组菌经IPTG诱导,通过SDS.PAGE分析显示,目的蛋白分子量约为20.91kD,且主要以包涵体形式存在,最佳诱导条件是37℃1mmol/LIPTG诱导5h.将获得的包涵体用6xHisNi-NTA纯化柱纯化后,采用Westemblot进一步检测到了21kD目的蛋白的表达.重组质粒pET.280L(+)一S14在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地得到了表达,不仅为SPOTl4基因生物学功能的研究,而且为进一步研究S14蛋白功能,了解脂肪代谢调控机制提供了基础资料.

江都站作为南水北调东线工程从长江取水的起点泵站,工程作用重要、运行十分频繁.本次按设计规划进行综合改造,涉及的工程数量多、范围广,施工对工程运行的影响较大,与运行的矛盾十分突出,为此,通过制订科学合理的总体实施方案、加强施工进度和安全管理、抓好工程调度运行管理、制订切实可行的应急措施等,妥善地处理了施工与运行的矛盾,在保证改造工程顺利实施的同时,工程效益也得到了充分发挥.

针对文本中冗余的欠缺,造成在文本中隐藏信息量少而难以实现隐密信息的传输,提出了一种基于聊天表情符号的信息伪装新方法,应用于网络聊天中以增加隐蔽性.该方法简单实用、可操作性强,实验证明,该算法具有良好的不可见性和安全性,容量也较为理想,达到信息伪装的目的.

以南水北调中线SG09标石方开挖爆破施工为例,采用理论计算、数值分析和本工程实际施工相结合的方法,详细分析了爆破对周围环境的影响范围及安全控制措施,为类似工程的施工提供了参考.

水土流失的预测是开发建设项目水土保持方案的重要工作之一,也是难点之一.目前在方案编制中,受时间、实测条件和费用等限制,大部分的水土保持方案在进行水土流失预测时都采取工程类比法.类比法在应用于工程上时,有直观、快速的优点,但相对来说不够严谨,论据不够有力.本文探讨了运用类比法的五个标准,来确保类比的准确性,进而提高预测结果的可信性.

结合南水北调天津干线工程建设管理具体工作实践,对南水北调中线天津干线施工控制体系构建、主要做法和成功经验进行了分析梳理总结,结果表明南水北调天津干线工程施工中的土方工程、混凝土工程,施工受季节影响以及施工工期受资源配置、施工方案的选择影响较大,在建设实施过程中通过合理安排施工,配置资源合理,优化施工方案,充分发挥整体钢模台车的整体优势,对加强工程实体质量控制等方面的实践是成功的,对进一步提高南水北调天津干线工程以及其它大型水利工程建设水平具有一定的借鉴意义.

运用瑞典圆弧滑动法对围堰布置及结构形式进行了验算,阐释了施工方法和施工过程.通过实践表明工程实施中采用木桩拦栅围挡、就近水中取土筑施工围堰,能有效地解决了土源问题,节约工程造价,缩短工程工期.木桩拦栅筑堤土围堰技术方案在浅滩、湖泊、内河等水面宽阔、水深在2~4m的地域推广运用,能取得明显的社会和经济效益.

α-乳清蛋白(α-lactalbumin,α-LA)是哺乳动物乳汁中一种重要的蛋白质,富含机体必需氨基酸和支链氨基酸,其极佳的氨基酸比例、易吸收性以及功能特异性,使得α-LA在婴幼儿个体正常生长中具有重要的意义.本实验旨在构建人α-乳清蛋白真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA,将其转染至猪(Sus scrofa)的成纤维细胞,获得稳定表达人仪一LA的细胞.根据猪基因密码子偏爱性优化并合成人α-乳清蛋白基因mRNA序列opLA,并将其定向克隆入pIRES2一ZsGreenl真核表达载体,双酶切及测序方法鉴定重组载体;脂质体介导的方法将载体转染入培养的猪成纤维细胞,荧光显微镜下观察转染效果,G418抗性筛选重组细胞;RT-PCR方法检测目的基因的表达.结果表明,通过酶切以及测序鉴定得到的重组载体pIRES2一ZsGreenl-opLA构建成功;荧光显微镜下观察,转染了plRES2-ZsGreenl-opLA和pIRES2一ZsGreenl空载体的细胞均发出绿色荧光,且荧光多集中于细胞核;筛选重组细胞的最小G418浓度为400ng/μL;RT-PCR法检测到与目的基因大小一致的片段,而未转染组和转染空载体组均未检测到.本实验成功构建真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA,并获得稳定表达目的基因的猪成纤维细胞,该细胞可作为进一步研究转基因克隆猪的供体细胞.