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茎一环RT-PCR法定量miRNA-421的引物设计
本研究旨在通过茎一环RT-PCR法,建立有效定量miRNA421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-d21,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎一环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎一环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点.赵丽,杨洋,温传俊 - 南京师大学报(自然科学版)文章来源： 万方数据 -
Has-miR-339-5p对裸小鼠人乳腺癌移植瘤形成及生长的影响
目的 建立miR-339-5p的稳定转染细胞系并探讨其在小鼠体内的成瘤性.方法 用Lipofectamine 2000介导的转染法将含miR-339-5p片段的质粒转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,以空载体作为阴性对照.并用G418作为筛选用药建立稳定转染细胞系.皮下原位接种癌细胞观察其对乳腺癌的形成及生长的影响.结果 RT-PCR技术检测稳定转染细胞系miR-339-5p miRNA的表达,与阴性对照组相比,其表达明显上调;接种miR-339-5p稳定转染细胞系组小鼠形成乳腺癌的时间明显迟于阴性对照组,且肿瘤生长较慢.结论 miR-339-5p可降低体内乳腺癌细胞的生长繁殖能力,有望成为乳腺癌治疗的潜在新靶点.聂静,吴正升,朱敬凤,黄山,吴强 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
基于数据分析探索APL中内含子microRNA与PML-RARα组成的调控环路
目的:探索急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)中microRNA、PML-RAR α与下游靶基因组成的调控模式.方法:应用基于染色质的免疫沉淀( chromatin immunoprecipitation on chip,ChIP-on-chip)技术并结合数据分析方法对miRNA和PML- RARα与下游靶基因形成的调控环路进行研究.结果:在PML-RARα所调节的基因中,相当一部分同时也在转录后被PML-RARα潜在调节的miRNAs所调节,从而组成特定的调控环路.对于不同的内含子miRNAs,类型Ⅰ的调控环路模式在白血病细胞分化过程中更为普遍存在.结论:APL中microRNA与PML-RARα通过特定的调控环路调控下游靶基因的表达.涂序辉,王侃侃,张济 - 海南医学院学报文章来源： 万方数据 -
肿瘤中DNA甲基化对miRNA调控作用的研究进展
miRNA的异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关,但miRNA的表达调控机制目前尚不清楚。有研究提示,在肿瘤细胞中DNA 甲基化异常会引起 miRNA 的表达改变,即DNA甲基化程度的改变将促进或抑制miRNA的表达,从而抑制或促进肿瘤的发生、发展。因此,DNA甲基化对miRNA的调控作用已成为肿瘤相关研究领域中的“新大陆”。该文就DNA甲基化调控miRNA的表达并参与人类肿瘤发生、发展的有关研究进展作一综述。顾页,林洁 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
运动心脏重塑过程中miRNA-350/JNK信号通路的动态变化
目的:通过递增负荷跑台运动建立运动性心肌肥大模型,观察miRNA-350及其靶基因在8周递增负荷运动诱导的心脏重塑中的动态变化,以探讨运动心脏重塑的可能机制.方法:96只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(C组)和递增负荷运动组(ILT组).正式训练的第7周末,用超声心动图检测各组小鼠心脏结构和功能参数;用qRT-PCR检测运动心脏重塑过程中不同时相(0d、3d、7d、15 d、29 d和57 d)miRNA-350的动态变化;分别用qRT-PCR和Western Blotting技术检测JNK mRNA和JNK蛋白的动态变化.结果:ILT组小鼠PWTS、PWTD、LVEDD、IVSTD和IVSTS等指标显著高于C组,EF无显著性差异;在运动心脏重塑过程中,ILT组小鼠心脏中miRNA-350的表达水平先快速增高再急剧下降,然后缓慢下降到与C组相当的水平;在递增负荷运动的0d、3d和7d,miRNA-350的靶基因JNK mRNA的表达水平没有显著变化,此后,JNK mRNA的表达水平呈上升趋势;在运动心脏重塑的初期,JNK蛋白的表达水平先显著下降再缓慢上升.结论:持续8周递增负荷跑台运动成功的诱导了小鼠心肌肥大;运动心脏重塑过程中miRNA-350、JNK mRNA和JNK蛋白呈动态变化,提示miRNA-350/JNK信号通路可能参与运动心脏重塑的调节.翟帅,陈佩林 - 体育科学文章来源： 万方数据 -
微小RNA传递载体聚乙二醇-b-聚赖氨酸的合成及细胞毒性研究
目的:制备微小RNA( miRNA)传递载体聚乙二醇-b-聚赖氨酸( PEG-b-PLL),并且选用模型细胞对其进行毒性考察。方法通过核磁谱测定聚赖氨酸的聚合度,用4%琼脂糖凝胶电泳检测聚复合物对miRNA的包封,用动态光散射法测定制备所得聚复合物粒径、多分散性指数(PDI),Zeta电位,用荧光标记的FAM-hsa-miR-15a进行包封率的测定,采用CKK-8试剂盒测定K562细胞(人慢性淋巴白血病细胞)活力考察PEG-b-PLL的细胞毒性。结果用PEG-b-PLL制备的聚阳离子胶束/miRNA复合物特性符合应用要求,并且细胞毒性显著低于聚乙烯亚胺( PEI ), lipo2000。结论离子聚合物载体PEG-b-PLL符合应用要求,同时毒性较低,有望成为基因转染的有效载体。任海峰,赵英魁,杨峰,俞媛,马志强 - 药学实践杂志文章来源： 万方数据 -
miRNA-24对内皮型一氧化氮合酶表达调节及血管内皮细胞增殖的影响
目的:为进一步探讨miRNA-24是否参与内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的调控及其对血管内皮细胞增殖的影响,本研究构建miRNA-24高表达质粒,并用脂质体将其导入人脐静脉内皮细胞( HUVECs ),观察miRNA-24对eNOS表达及HUVECs增殖的影响。方法:用四甲基偶氮唑蓝( MTT)法检测细胞增殖情况,RT-PCR、免疫组织化学和Western blotting检测eNOS与Sp1转录因子mRNA和蛋白表达水平。结果:与对照组比较, miR-NA-24高表达组细胞增殖减慢41.97%(0.47±0.04 vs 0.81±0.03, P<0.01),eNOS mRNA降低44.8%(0.48±0.01 vs 0.87±0.03,P<0.05),蛋白表达减少71.92%(0.16±0.06 vs 0.57±0.08,P<0.05);同时Sp1 mRNA降低53.00%(0.45±0.02 vs 0.93±0.01,P<0.05),其蛋白质表达量也相应减少62.31%(0.13±0.07 vs 0.31±0.09, P<0.05)。 miRNA-24抑制组中,上述指标比对照组降低,但比miRNA-24高表达组明显升高。结论:miRNA-24高表达明显抑制HUVECs的增殖及eNOS的表达;Sp1可能是参与miRNA-24调控eNOS表达的重要因素之一。张文宇,王辉,李玉媚,陈伟,胡楠,欧和生 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据
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