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百草枯所致血管内皮损伤与p120连环蛋白的关系及芒果苷的保护作用
目的 探讨百草枯中毒导致的内皮屏障功能障碍与p120连环蛋白(p120-ctn)的关系,以及芒果苷对p120-ctn的调节作用.方法 采用二室弥散模型培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),并分为对照组(给予含10%胎牛血清的DMEM培养液)、百草枯组(给予终浓度为0.05 μmol/L的百草枯培养液)和芒果苷干预组(百草枯培养基孵育30 min后加入终浓度为20 μmol/L的芒果苷继续孵育).各组分别培养6、12、24、48、72 h后测定细胞通透性;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定p120-ctn异构体p120-ctn 1A、p120-ctn 3A的mRNA表达及p120-ctn蛋白表达;采用免疫荧光分析并镜下观察p120-ctn的分布.结果 与对照组比较,百草枯组和芒果苷组细胞通透性均随时间延长呈增加趋势,于72 h达峰值[(29.86±3.98)%、(24.39±2.79)%比(11.71±1.67)%,均P< 0.05];而芒果苷组各时间点细胞通透性均显著低于百草枯组(均P<0.05).百草枯处理6 h p120-ctn 1A、p120-ctn 3A的mRNA表达(灰度值)及p120-ctn蛋白表达(灰度值)即较对照组明显降低(p120-ctn 1A mRNA:0.150±0.024比0.433±0.024,p120-ctn 3A mRNA:0.316±0.043比0.701±0.020,p120-ctn蛋白:0.485±0.031比0.763±0.038,均P<0.01);而芒果苷组p120-ctn 1A、p120-ctn 3A的mRNA表达及p120-ctn蛋白表达于干预6h即较百草枯组明显增加(p120-ctn 1AmRNA:0.281 ±0.021比0.150±0.024,p120-ctn 3A mRNA:0.602±0.042比0.316±0.043,p120-ctn蛋白:0.675±0.031比0.485±0.031,均P<0.01),并均随时间延长呈增加趋势,于72 h达峰值(p120-ctn 1A mRNA:1.376±0.128比0.150±0.024,p120-ctn 3A mRNA:1.251±0.059比0.316±0.043,p120-ctn蛋白:0.844±0.050比0.485±0.031,均P<0.01).荧光显微镜下观察,对照组p120-ctn主要分布在胞膜上,胞质内略有表达,胞核无表达;百草枯组随时间延长,细胞膜上p120-ctn表达逐渐减少,胞质和核内表达增多,细胞膜边缘模糊,细胞间隙增宽;芒果苷组相应时间点细胞膜上p120-ctn表达有所改善,胞质和核内表达减少.结论 p120-ctn下调与百草枯中毒后内皮通透性增加的机制相关,芒果苷可通过保护p120-ctn而减轻内皮损伤.何庆,艾娇,黄煜 - 中华危重病急救医学文章来源： 万方数据 -
硫化氢对高糖诱导的小鼠足突细胞损伤的影响
目的:观察硫化氢对高糖诱导的小鼠足突细胞损伤的影响并探讨其作用机制。方法:将体外培养的小鼠足突细胞系MPC5分为高糖组、正常糖组、正常糖+DL-炔丙基甘氨酸( PPG)组和高糖+NaHS组。处理后,用Western blotting检测各组细胞胱硫醚γ-裂解酶(CSE)、紧密连接蛋白2(ZO-2)、裂孔蛋白(nephrin)及β-连环蛋白(β-catenin)蛋白水平表达差异。结果:(1)高糖显著降低CSE、nephrin和ZO-2表达(P<0.05),而β-catenin的水平明显增高(P<0.05),4种蛋白变化均表现出时间依赖性;(2)正常糖培养加不同浓度PPG可显著抑制ZO-2和nephrin的表达(P<0.05),显著提高β-catenin的水平(P<0.05),3种蛋白变化呈浓度依赖性;(3)高糖诱导的足突细胞加NaHS培养后,ZO-2和nephrin表达可部分恢复(P<0.01),β-catenin表达可被部分抑制(P<0.01)。结论:本研究结果提示高糖诱导的足突细胞CSE表达降低可能是足突细胞损伤的重要机制之一。而外源性硫化氢对高糖诱导的足突细胞损伤具有一定保护作用,其机制可能与增加ZO-2表达、抑制Wnt/β-catenin通路有关。刘晔,彭力,卢圣霞,杜月娟,刘元涛,傅余芹 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
卵巢浆液性腺癌中Wnt信号通路成分β-catenin、c-myc的表达及意义
目的 检测Wnt信号通路成分β-catenin、c-myc在卵巢浆液性腺癌(ovarian serous adenocarcinoma,OSA)中的表达,探讨其与肿瘤FIGO分期、病理分级、复发的关系.方法 应用免疫组化EnVision两步法检测60例OSA中β-catenin、c-myc的表达,并进行预后分析.结果 (1)FIGO分期:β-catenin在Ⅲ+Ⅳ组中的表达高于Ⅰ+Ⅱ组(P =0.003);c-myc表达与FIGO分期无关(P=0.069).(2)病理分级:β-catenin的表达与病理分级无关(P =0.817);c-myc在高级别组中的表达高于低级别组(P=0.016).(3)复发:β-catenin、c-myc表达与患者复发均无关(P =0.349,P=0.171).(4)预后分析:β-catenin、c-myc阳性组患者的生存率均低于阴性组(P=0.032,P=0.035).结论 Wnt信号通路成分β-catenin、c-myc可能在OSA的发生、发展及患者的不良预后中发挥作用,检测其表达可能具有一定的临床意义.戴颖青,管群,刘琦,王建军,余波,王建东,石群立 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
ILK siRNA对高糖刺激的人肾小管上皮细胞GSK-3β及β-catenin表达的影响
目的:探讨高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中整合素连接激酶小干扰RNA(ILK siRNA)对糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)磷酸化和β-连环蛋白(β-catenin)核内表达的影响及意义.方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞系HKC,分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖+阴性转染对照组 (HG+HK)和高糖+ILK siRNA组(HG+ILK siRNA).倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达.RT-PCR及Western blotting检测ILK mRNA及蛋白表达水平;免疫细胞化学检测磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)和β-catenin表达.Western blotting检测总GSK-3β、p-GSK-3β、核β-catenin、总β-catenin、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平.结果:(1)倒置荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达,证实构建的siRNA重组质粒成功转染HKC细胞;(2)与HG和 HG+HK组相比,HG+ILK siRNA组ILK mRNA及蛋白水平下降,但较NG组表达仍高;(3)HG+ILK siRNA组ILK基因沉默后,p-GSK-3β与核β-catenin蛋白表达较HG及HG+HK组均下降,但较NG组表达仍高.而总GSK-3β与总β-catenin 在各组表达无明显差异.结论:ILK、GSK-3β和β-catenin可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程.ILK可能通过调节Wnt/β-catenin途径下游效应蛋白GSK-3β和β-catenin的表达而促使肾小管上皮细胞转分化.闫喆,姚芳,张丽萍,郝军,吴海江,段惠军 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
ILKsiRNA对高糖刺激的人肾小管上皮细胞GSK-313;及β-catenin表达的影响
目的:探讨高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中整合素连接激酶小干扰RNA(ILK siRNA)对糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)磷酸化和β-连环蛋白(β-catenin)核内表达的影响及意义.方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞系HKC,分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖+阴性转染对照组 (HG+HK)和高糖+ILK siRNA组(HG+ILK siRNA).倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达.RT-PCR及Western blotting检测ILK mRNA及蛋白表达水平;免疫细胞化学检测磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)和β-catenin表达.Western blotting检测总GSK-3β、p-GSK-3β、核β-catenin、总β-catenin、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平.结果:(1)倒置荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达,证实构建的siRNA重组质粒成功转染HKC细胞;(2)与HG和 HG+HK组相比,HG+ILK siRNA组ILK mRNA及蛋白水平下降,但较NG组表达仍高;(3)HG+ILK siRNA组ILK基因沉默后,p-GSK-3β与核β-catenin蛋白表达较HG及HG+HK组均下降,但较NG组表达仍高.而总GSK-3β与总β-catenin 在各组表达无明显差异.结论:ILK、GSK-3β和β-catenin可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程.ILK可能通过调节Wnt/β-catenin途径下游效应蛋白GSK-3β和β-catenin的表达而促使肾小管上皮细胞转分化.闰喆,姚芳,张丽萍,郝军,吴海江,段惠军 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
EBV-LMP2A和β-catenin蛋白在鼻咽癌中的表达关系及意义
目的探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)和β-连环素(β-catenin)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达关系及其临床意义.方法应用免疫组化SP法检测LMP2A和β-catenin蛋白在32例鼻咽黏膜慢性炎、56例NPC和18例NPC淋巴结转移灶中的表达,采用Western blot法和免疫荧光细胞化学染色法观察LMP2A和β-catenin蛋白在CNE2-LMP2A细胞及其对照组CNE2-Vector和CNE2细胞中的表达.结果 (1)LMP2A在NPC及其淋巴结转移灶中的阳性率分别为89.3%(50/56)和77.8%(14/18),均明显高于鼻咽黏膜慢性炎(37.5%,12/32)(P均<0.01);β-catenin在NPC及其淋巴结转移灶中的异常表达率分别为62.5%(35/56)和83.3%(15/18),均明显高于鼻咽黏膜慢性炎(3.1%,1/32)(P均<0.01);LMP2A与β-catenin正常表达呈负相关(rs=-0.391,P<0.01);LMP2A和β-catenin蛋白在鼻咽癌T分期、N分期和临床分期组间表达率的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).(2)CNE2-LMP2A细胞中β-catenin蛋白表达水平明显高于CNE2-Vector和CNE2细胞;CNE2-LMP2A细胞中β-catenin胞质和胞核的表达水平明显高于CNE2-Vector和CNE2(P均<0.01).结论 LMP2A高表达和β-catenin异常表达与鼻咽癌临床生物学行为进展密切相关,其机制可能与LMP2A上调β-catenin蛋白水平并促进其核转位有关.赵利容,饶洁,王艳,罗泊涛,陈小毅 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
甘氨双唑钠协同顺铂有效促进肺腺癌细胞中p21表达
目的:探讨甘氨双唑钠(CMNa)协同顺铂对肺腺癌细胞中p21表达的影响及其分子机制.方法:使用NCBI公共数据库分析顺铂对人肺腺癌细胞作用的mRNA芯片数据,寻找差异基因;对人肺腺癌A549细胞系用CMNa和顺铂处理,用real-time PCR技术验证A549细胞系差异基因的表达;用RT-PCR及染色质免疫沉淀技术进一步检测CMNa对p21及其上游分子p53表达的影响.结果:通过参考公共数据库中顺铂处理A549细胞系的mRNA芯片数据,对若干差异表达基因进行实验验证,发现p21受顺铂影响最为显著;CMNa联合顺铂处理可以有效促进A549细胞系p21的表达,但对A549细胞系单纯进行CMNa处理,p21无明显变化.此外,通过染色质免疫沉淀检测发现,CMNa联合顺铂处理可增加上游分子p53的表达,从而引起p21的上调.结论:CMNa可以协同顺铂上调p53表达,从而促进人肺腺癌细胞p21的表达,这提示CMNa对肺腺癌细胞的放疗增敏作用可能还有新的作用机制.廖小方,赵中洪,郭绍文,彭政,朱小平,王燕,邹燕,胡伟 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
p110δ突变失活上调血管MMPs表达并引发血管壁结构损伤
目的:研究p110δD910A基因突变失活(p110δ-mutant)对动脉血管结构的影响及机制.方法:选取8周龄雄性的野生型(WT)小鼠与p110δ-mutant小鼠(n=20;20~25 g),取胸主动脉进行石蜡包埋,HE染色,采用免疫组化、免疫荧光以及real-time PCR等方法,研究p110δ突变对小鼠动脉血管形态变化的影响及机制.结果:与WT相比,p110δ突变失活后小鼠主动脉血管壁变薄,管腔变大.p110δ突变失活后主动脉血管壁形态紊乱,弹力纤维局部断裂,血管中内皮细胞凋亡.p110δ突变失活后主动脉血管α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达量、胶原Ⅰ和胶原Ⅳ含量减少.p110δ突变失活后主动脉血管中的基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和MMP-9的mRNA水平明显升高.结论:PI3K活性在维持小鼠动脉血管的正常形态中起重要作用,p110δ突变失活后可能通过上调基质金属蛋白酶的表达促进血管壁结构的破坏.邢丽英,郑凌云,吴玉娥,曾翠玲,桂亚丽,方海燕,吴腾,王丽京,李卫东 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
米诺环素调控P2X7受体抑制BV-2细胞活化的研究
目的:探索P2X7受体在米诺环素(Mino)抑制脂多糖(LPS)刺激的BV-2细胞活化中的作用。方法:将体外培养的BV-2细胞分为5组:空白对照组、LPS处理组、LPS+0.1μmol/L Mino组、LPS+1μmol/L Mino组和LPS+10μmol/L Mino组。分组处理8 h后行real-time PCR检测P2X7受体mRNA表达;处理24 h后观察各组细胞形态学变化,Western blotting检测P2X7受体蛋白表达,取细胞培养液上清行ELISA检测TNF-α和IL-1β的分泌情况。结果:经LPS处理后,BV-2细胞P2X7受体mRNA及蛋白的表达均升高,细胞培养液上清的TNF-α和IL-1β表达升高,同时伴有形态学的改变,而0.1~10μmol/L Mino 能抑制这一趋势,差异有统计学意义( P <0.01)。结论:Mino抑制BV-2细胞活化的机制可能与抑制P2X7受体的活性相关。- 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
下调 p21活化蛋白激酶2表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:应用RNA干扰技术下调人乳腺癌MCF-7细胞中p21活化蛋白激酶2( PAK2)的表达,观察其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建针对PAK2基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体并包装病毒颗粒,感染MCF-7细胞,筛选获得稳定细胞株。 Western blotting检测细胞中PAK2蛋白表达水平的改变;CellTiter 96 AQueous法和软琼脂集落形成实验检测MCF-7细胞体外增殖能力的改变;流式细胞术检测十字孢碱诱导的MCF-7细胞凋亡的变化。结果:MCF-7细胞的PAK2基因被沉默后,PAK2蛋白表达量明显下降(P<0.01),与阴性对照组相比,sh-PAK2组细胞生长明显减缓(P<0.01),克隆形成的数目和大小明显下降(P<0.01),十字孢碱诱导的细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论:通过RNA干扰技术下调PAK2的表达,可抑制MCF-7细胞的生长和增殖,并增强其对化疗药物诱导的细胞凋亡的敏感性。 PAK2可能是潜在的乳腺癌治疗的新靶点。- 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据
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