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丝状噬菌体pⅧ展示系统表达赭曲霉毒素A模拟表位及应用研究
目的传统赭曲霉毒素A(OTA)竞争抗原毒性强、成本高、制备难度大.将OTA模拟表位展示于丝状噬菌体pⅧ表面,获得无毒、易于制备的OTA竞争抗原替代物.方法构建带有OTA模拟表位的重组噬菌粒pC89-COTA,为了提高OTA模拟表位与抗体的结合率,在OTA模拟表位序列5'端引入了肠激酶酶切位点.噬菌粒转化进大肠杆菌XL1-blue后再经野生KM13噬菌体感染,获得带有OTA模拟表位的重组噬菌体.用该噬菌体代替竞争抗原建立OTA的无毒ELISA分析方法.结果成功表达出带有OTA模拟表位的重组噬菌体,经肠激酶酶切的OTA模拟表位噬菌体与OTA抗体的结合效率显著高于未酶切的噬菌体.利用酶切后的噬菌体建立OTA的无毒ELISA分析方法,其最低检出限为100pg/ml,线性范围为250pg/ml~1000pg/ml.进行加标回收实验,回收率为99.8%~112.3%,相对标准偏差为8.19%~11.64%,测试16份市售样品,阳性率为31.25%.结论成功表达了OTA模拟表位噬菌体,建立了OTA的无毒ELISA检测方法.陈兴龙,徐玲,刘仁荣,裘雪梅,朱立鑫 - 卫生研究文章来源： 万方数据 -
耐力运动对营养性肥胖小鼠骨骼肌细胞自噬及线粒体自噬的影响
目的:探讨耐力运动对营养性肥胖小鼠骨骼肌细胞自噬及线粒体自噬的影响及其分子机制。方法:采用6周高脂膳食干预诱导生长期IC R雄性小鼠营养性肥胖模型,建模成功后随机分为高脂膳食对照组(HC ,6只)、普通膳食干预组(HN ,6只)及普通膳食联合耐力运动干预组(HNE ,6只),另选造模对照ICR小鼠为普通膳食对照组(NC ,6只),HC组小鼠持续喂养6周高脂膳食,NC、HN、HNE饲以普通膳食,HNE组小鼠进行6周跑台耐力训练,速度按周递增即15 m/min、22 m/min、27 m/min、31 m/min、35 m/min、35 m/min ,40 min/次,6次/周。末次训练24 h后处死小鼠并采样,应用JC‐1探针法检测线粒体膜电位,RT‐PCR及Western Blotting 技术检测相关基因及蛋白表达情况。结果:1)6周高脂膳食可诱导小鼠体重、LEE’s指数及附睾脂肪百分比显著增加(P<0.05),BG、TG、TC、HDL‐C、LDL‐C含量显著增加( P<0.05);2)与 HC比,HNE组骨骼肌 M HCⅠ、Ⅱa、Ⅱc表达均显著增加( P<0.05), HN、HNE组M HCⅡb mRNA表达均下调;3)与 NC比,HC组骨骼肌线粒体膜电位显著降低( P<0.05),HC、HN、HNE组小鼠骨骼肌mtDNA拷贝数量下降( P<0.05);4)与 NC组比, HC组小鼠细胞自噬相关信号分子 ATG 13、LC3 mRNA 表达下调,P62 mRNA 表达上调;HN、HNE组BECN1、ATG 13及LC3 mRNA含量显著增加(P<0.05),HC组LC3Ⅱ/Ⅰ比值下降,HN、HNE组小鼠骨骼肌 p62蛋白水平下降,HNE组 LC3Ⅱ/Ⅰ比值上调;5) HC 组 NIX mRNA表达与 NC组比下调,而在 HN、HNE组含量增加;HNE组 PARK2、PARL mRNA 较HN组上调;HC组 PINK1蛋白含量有所下调,而在 HN及 HNE组普遍上调( P<0.05)。结论:1)长期高脂膳食干预可诱导营养性肥胖发生,引起机体代谢紊乱、骨骼肌线粒体功能异常;2)耐力运动结合膳食改善可有效控制营养性肥胖小鼠体重并促进肌球蛋白的表达;3)耐力运动结合膳食改善可缓解营养性肥胖机体细胞自噬水平的下降,而对线粒体自噬的影响主要通过作用于 PINK1/Parkin信号以调控骨骼肌线粒体的数量和功能。崔迪,邱守涛,王海燕,贺杰,漆正堂,孙易,丁树哲 - 体育科学文章来源： 万方数据 -
冲击碾压联合强夯分层填筑压实试验研究
为了研究在粗粒土高填方工程中冲击碾压联合满夯进行分层填筑压实的效果,首先开展强夯与冲击碾压专项试验,获得两种压实方法的施工参数,然后在试验区进行冲碾联合强夯分层填筑压实施工,并对填筑效果进行检测.开展强夯专项试验,由单点夯试验确定了强夯最佳击数,通过进行取消满夯试验,获得了不同施工流程的施工效果;开展冲碾专项试验,通过干密度、固体体积率、碾压沉降量检测确定了不同虚铺料厚度、不同碾压遍数下的冲碾效果.在试验区联合使用两种工法进行分层填筑压实,结果表明:工程施工进度快,无论强夯处理层还是冲碾处理层都能达到设计要求,整个填筑体的压实质量高.赵帅军,陆新,孙发鑫,王诚 - 工程勘察文章来源： 万方数据 -
自噬与人类疾病最新研究进展
自噬在人类疾病的发病、发展中起双重作用.自噬是发生在真核细胞内的一种内稳态过程,双层膜包绕着要降解的细胞器等形成自噬体,随后与溶酶体融合,对组分进行降解和回收再利用.近年来,许多研究表明自噬和人类疾病密切相关.自噬广泛存在于肿瘤、新陈代谢、神经退化紊乱和肺疾病等各种病理过程中.深入了解自噬的分子基础,对人类疾病诊断以及寻找药物作用新靶点具有重要意义.刘艳,刘中洋,袭荣刚,王晓波 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
罗布泊地区粗粒盐渍土盐胀特性影响因素试验研究
为研究罗布泊地区粗粒盐渍土的盐胀特性及盐胀机制,本文对取自该地区哈若公路沿线粗粒盐渍土进行了室内土工试验和盐胀分析试验,对盐胀特性试验以后的试样进行了5000倍放大扫描电子显微镜下微观结构变化分析.试验结果表明:该区域粗粒盐渍土呈板块状,盐渍土剧烈盐胀区主要发生在温度为+15-5℃的范围之内;在相同条件下盐渍土易溶盐的含量与盐渍土最大盐胀率呈二次抛物线型关系.结合盐渍土路基的病害特点研究了该地区盐渍土的盐胀率和压实度之间的相互联系,含水量一定时,该地区盐渍土的盐胀量会随路基压实度的增大而增加.刘毅 - 工程勘察文章来源： 万方数据 -
雷帕霉素减缓大鼠被动 Heymann 肾炎的进展
目的:观察雷帕霉素对大鼠被动Heymann肾炎( PHN)的影响,并探讨自噬在其中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为3组,即对照组、PHN模型组和雷帕霉素治疗组。以造模后第21天为观察结点,采用全自动生化分析仪测定24 h尿蛋白总量、血尿素氮和血清肌酐,过碘酸-六次甲基四胺银染色观察肾脏病变,Weibel-Go-mez点计数方法计数足细胞数量,免疫荧光染色检测肾小球内C5b-9的沉积,免疫组化染色观察caspase-3的表达, Western blotting检测肾小球LC3的表达。结果:雷帕霉素明显减轻PHN模型大鼠的蛋白尿排出(P<0.05),同时各组大鼠的肾功能均正常,其间无显著差异;雷帕霉素使PHN大鼠肾小球基底膜增厚的程度和范围有所减轻;雷帕霉素明显改善PHN大鼠足细胞缺失情况,减少足细胞凋亡;雷帕霉素可增强肾小球内固有细胞的自噬水平。结论:在PHN的病变过程中,适度增强自噬减少足细胞凋亡,减轻肾脏病变和缓解蛋白尿,可能是雷帕霉素减缓大鼠PHN进展的重要机制之一。杨凤杰,周建华,吕倩影,蒲金赟,张瑜 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
脂多糖通过PI3彰Akt/mToR通路调控巨噬细胞自噬
目的:观察脂多糖对巨噬细胞自噬活化的影响及相关信号通路的探讨.方法:体外培养巨噬细胞株RAW264.7,分为对照组、饥饿状态激活自噬组、单纯脂多糖(LPS)刺激组、LPS+P13K抑制剂(hVps34)组和LPS+roTOR抑制剂(雷帕霉素)组.构建荧光真核表达载体pcDNA3.1.GFP-LC3,转染巨噬细胞,通过荧光显微镜观察各组细胞中自噬体形成情况.qRT.PCR方法检测各组中与细胞自噬相关的Atg5、Atg7、LC3一II和Bnip3mRNA表达水平的改变.利用Westernblotting检测LC3-II、P-Akt和p-roTOR蛋白在各组中的表达情况,以评价LPS激活巨噬细胞自噬的分子通路.结果:成功构建稳定表达GFP.LC3的巨噬细胞,在荧光显微镜下可以观察到自噬在饥饿状态组、LPS+hVps34组和U玛+雷帕霉素组均有明显增强;qRT-PCR检测到Atg5、LC3-II和Bnip3mRNA的表达在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组均有明显增强,而在LPS组中略微下降;Westernblotting检测发现p-Akt在饥饿状态组、LPS组和LPS+雷帕霉素组中表达明显升高;p-mTOR在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组表达明显下降;LC3-II的表达在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组中表达要高于对照组和LPS组.结论:LPS参与巨噬细胞自噬的调控,其可能的信号通路为P13K/Akt/mTOR通路,但仍存在其它有效的调控通路.杜涛,黄海,陈欣,丁红,张睿,刘梅兰,陈慧 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
草醇提取物的抑菌活性及稳定性研究
目的:对甘草醇提取物的抑菌活性及稳定性进行研究.方法:以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为指示菌,进行甘草醇提取物的抑菌试验和稳定性试验.结果:甘草醇提取物对革兰氏阳性细菌具有较好的抑菌效果,其最小抑菌浓度为1.25mg/mL.结论:甘草醇提取物在偏酸性pH紊件下的抑菌效果较好.温度处理和光照对甘草醇提取物抑菌活性影响较大,但90qC处理30min和光照72h后仍具有一定的抑菌作用.张煜炯,何艳丽,李鸿文 - 江苏中医药文章来源： 万方数据 -
旋转机械油路磨粒传感器的设计及仿真研究
设计一种应用于旋转机械油路检测系统的在线式油路磨粒传感器,其性能直接影响油路检测系统的监测结果。重点对传感器检测原理和结构特性等进行定性分析,根据电磁场原理和毕奥-萨伐尔定律等电磁学理论,推导并建立平衡线圈磁场分布数学模型以及传感器输出模型,研究影响传感器输出和磁场分布的几大因数,最后利用电磁场仿真软件对传感器平衡结构线圈的磁场分布进行仿真,为传感器的设计、优化改进提供了重要的理论依据。张平,潘兆马,余细雨,邓雪峰,罗仁泽 - 传感技术学报文章来源： 万方数据 -
蚜虫内共生菌基因组DNA提取方法的比较和优化
为探究蚜虫共生菌基因组DNA的提取方案,以桃蚜为试验材料,比较了目前较为常用的4种蚜虫基因组DNA提取方法,从DNA纯度、完整性、PCR扩增效率及稳定性等方面进行了比较和评价,并通过调整蛋白酶K用量和水浴温度及时间对STE法进行了优化.结果表明,4种方法提取的蚜虫共生菌基因组DNA均可用于共生菌的PCR扩增检测;CTAB法和SDS法提取的DNA纯度较高,条带较完整,稳定性相对较高,不易降解,而STE法和PCR缓冲液法操作简便,适于快速提取单头蚜虫共生菌的基因组DNA,但纯度相对较低;可根据试验条件和要求进行选择.STE法优化条件为:用30μL STE缓冲液将蚜虫匀浆,加入1.5μL 20 mg/m L蛋白酶K,于56℃水浴1.5 h;再加入0.1μL 10 mg/L RNA酶,于37℃培养1 h,95℃下处理5 min,5 000 r/min离心3 min,将提取到的DNA于-20℃保存或直接用于PCR扩增.优化后的STE法可作为提取蚜虫共生菌基因组DNA经济而快捷有效的方法.宋月,樊永亮,武丽娟,张战凤,刘艳红,刘同先 - 植物保护学报文章来源： 万方数据
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