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基于荧光显色的IBV LAMP检测方法研究
【目的】建立基于荧光显色的可视化禽传染性支气管炎病毒（IBV）环介导等温扩增（LAMP）检测体系，为IBV的快速临床检测提供有力的技术支持。【方法】根据NCBI中收录的IBV 5a＋5b基因的8个区域设计了3对LAMP引物，通过对反应体系各组分和条件的优化，建立IBV LAMP检测方法，并对该方法的特异性和敏感性进行验证。分别用SYBR Green I和一定浓度比的钙黄绿素/锰离子混合物作为显色剂，对IBV LAMP检测结果进行可视化判定。应用该检测体系和PCR方法对临床送检的60份样品同时进行检测，比较2种方法的阳性检出率。【结果】成功建立了IBV LAMP检测方法，该方法能够在等温（63 ℃）条件下1 h内完成反应，具有良好的敏感性和特异性，最低可以检出1拷贝/μL的阳性重组质粒，比普通PCR方法敏感100倍，而对其他病毒检测结果均为阴性。应用SYBR Green I和钙黄绿素/锰离子显色时，阴阳性样品均有强烈的颜色对比，其中0.05 mmol/L钙黄绿素与0.6 mmol/L锰离子混合液可以用于LAMP扩增产物的判断，其结果与琼脂糖凝胶电泳结果一致。在对60份临床样本的检测中，LAMP和PCR方法检测出的阳性样本数量分别为49份和42份。【结论】建立了基于荧光显色的IBV LAMP检测方法，该方法具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力。张琳,马利,丁雅苓,逯茂洋,胡北侠,杨少华,张秀美 - 西北农林科技大学学报(自然科学版)文章来源： 万方数据 -
1MeV电子加速器辐照剂量的测量
目前吸收剂量的测量方法有多种,对低能电子束吸收剂量进行测量时,由于受到电子束穿透深度、热效应、动态加工等因素的影响,可用方法很少,通常用显色薄膜剂量片进行测量.本文采用FWT-60-00薄膜显色剂量片测量1MeV低能电子束进行辐照加工时的吸收剂量,研究了吸收剂量与束流强度、辐照时间、束下装置运行速度的关系,测量了材料中吸收剂量的深度分布,并对加速器能量进行了校正.结果表明:在相同的辐照时间和电子能量下,吸收剂量随束流的增加线性增长;速度较高时,吸收剂量与小车速度也呈现出良好的线性关系.杜纪富,姜灿,王升,陈思,李月生 - 测试技术学报文章来源： 万方数据 -
FISH技术在93例自然流产绒毛及胎儿组织中的应用
染色体异常包括胚胎染色异常和夫妇染色体异常,是自然流产最常见的原因,其中胚胎染色异常是导致自然流产发生的主要原因[1].采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对自然流产的绒毛及胎儿组织中的13、16、18、21、22、XY染色体数目异常进行检测,FISH具有成功率高、准确、省时,对检测标本限制低等优点[2].而如何确保FISH的制片质量尤为重要,本文着重介绍FISH技术操作在3种类型流产组织中的应用体会.1材料与方法1.1标本来源收集广州医科大学附属第三医院病理科诊刘少颜,杨嶽鑫,谭学贤,罗秋萍 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
PEI修饰的量子点作为叶酸荧光探针的应用研究
目的:发展一种基于量子点的重现性好、灵敏度高、选择性强的检测叶酸的荧光探针.方法:以聚乙烯亚胺功能化量子点,使其表面拥有大量氨基,利用叶酸的羧基和量子点表面氨基的静电吸附作用导致的电子转移调控量子点的荧光.结果:该探针对于光照和pH变化均有良好的耐受性,而且对于叶酸的检测有良好的选择性,可以抵抗很多金属离子和小分子的干扰.2.0μmol/L叶酸的加标回收率在99%~104%.检测限为35 nmol/L,与同类型的叶酸荧光探针的最佳检测限具有可比性.结论:基于PEI-QDs的叶酸荧光探针具有良好的重现性、灵敏度和选择性,有望成为替代液相色谱检测叶酸的高效、廉价分析手段.张毅,史学丽,曹海燕,周宝宽 - 天津医科大学学报文章来源： 万方数据 -
荧光定量PCR检测石蜡组织中结核分枝杆菌
目的 改进石蜡组织的处理,提高结核分枝杆菌在石蜡组织中检测的敏感性.方法 选择荧光定量PCR检测石蜡组织结核分枝杆菌检测结果为临界值的蜡块标本,行HE染色、抗酸染色及荧光定量PCR石蜡组织结核分枝杆菌DNA检测.通过对其石蜡组织少修片、混合多个蜡块、选择干酪样坏死及肉芽肿病变较多的蜡块以及适量增加模板量的多种方法,对比其在荧光定量PCR法中的检出率.结果 各实验组Ct值减小,扩增曲线均有不同程度的升高.结论 改进操作措施后可以提高蜡块中结核分支杆菌检测的敏感度.杨长绍,王丽,潘鑫艳,王力,黎贵芸,杨举伦 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
土壤样品中微生物活性的荧光分析方法
以土壤为供试样品,基于荧光素二乙酸酯(FDA)水解反应产生的荧光素含量与土壤中微生物活性呈比例的现象,探讨了荧光光度法测定土样中微生物活性的可行性,提出采用荧光光度法测定环境样品中微生物活性的新方法.对测定所涉及的物理参数和化学参数进行了优化.在最佳实验条件下,方法的线性响应范围为荧光素含量2-2000#g.L-1,线性相关系数(r)=0.9971,方法的检出限(3σ)为3.1*10-2#g.L-1,方法的相对标准偏差(RSD)为2.8%(n=5),对4个土壤样品荧光素含量测定的回收率为90.6%-104%.所建立的方法具有简单快速、灵敏度高、线性范围宽、试样用量少等优点,可用于土壤、水等环境样品中微生物活性的测定.王佳佳,周桦,张进,范世华 - 环境化学文章来源： 万方数据 -
柑橘花器和种子中黄龙病菌的定量分布及应用
为准确、快速测定感病柑橘花器和种子中黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,Las)的含量,比较了SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(SGI-qPCR)和单管双引物对TaqMan探针qPCR(STDP-qPCR)的检测灵敏度,并用STDP-qPCR法定量检测了感病沙田柚花器和种子中的Las.结果显示,STDP-qPCR检测灵敏度为1*100拷贝/μL,比SGI-qPCR高100倍;花器中的雄蕊、花瓣、雌蕊和花粉等组织,以及种子的种皮和胚乳组织中均可检测到Las,但含量差异较大,其中种皮组织中Las含量最高,达到109842个细胞/μg DNA,花粉中的Las含量最低,为308个细胞/μg DNA,所有种壳中均未检测到Las;基于雄蕊组织的黄龙病分子诊断准确率达93.8%.表明Las在感病柑橘花器和种子中呈不均匀分布,基于雄蕊组织的黄龙病诊断方法可辅助用于该病害的高通量检测.娄兵海,宋雅琴,赵小龙,白先进,邓崇岭 - 植物保护学报文章来源： 万方数据 -
芯泵浦高功率宽带谱平坦长波段光纤光源
为了获得高功率、宽带宽及谱平坦的长波段掺铒光纤光源,基于2级双程芯泵浦,应用偏振复用技术实现泵浦瓦级供给,在泵浦总功率和光纤总长度都不变的情况下,数值分析了4种光源结构的输出特性受泵浦和光纤分配比例的影响。结果表明,4种结构基本都能工作于L波段(1565nm~1610nm),带宽受结构影响较小,但只有"双程后向+双程后向"结构可同时拥有高输出功率和高平坦度。其在总泵浦功率750mW,第一级泵浦功率为300mW,第二级泵浦功率为450mW时,和光纤总长度21m,第一级光纤长度为18m,第二级光纤长度为3m时,可实现输出功率314mW,带宽32.41nm,中心波长1584.84nm,平坦度2.23dB的L波段超荧光光源。郑彦敏,林碧金,强则煊,陈曦曜,李晖,邱怡申 - 应用光学文章来源： 万方数据 -
荧光原位杂交诊断胸水直接涂片EML4/ALK融合基因1例
患者女性,76岁,左侧肺癌病灶靶向放疗后,出现大量胸水.将送检胸水用一次性病变细胞采集器(B型)(北京金木信诚公司)富集细胞后,将膜片细胞富集面置于防脱载玻片上,来回拖动几次,使膜上细胞转移至载玻片上(图1、2),固定,HE染色,镜下观察.一次性病变细胞采集器(B型)采用医用高分子材料PET滤膜,孔径8~12μm,可有效滤过淋巴细胞,大量采集体液中的肿瘤细胞或预检细胞,可避免淋巴细胞的干扰,降低漏诊率,提高诊断阳性率.病理检查镜检:癌细胞呈腺样、栅栏状排列.癌细胞纪晓坤,王珩,张艳,赵银环,吴家宁,王蕊,吴娟,杜芸 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
检测伪狂犬病毒gB基因荧光定量PCR方法的建立
利用DNAMAN软件对GenBank登录的伪狂犬病病毒(PRV)各毒株gB基因序列进行比对分析,选择其保守区域设计合成特异性的引物和TaqMan探针,同时利用普通PCR技术扩增获得全长的伪狂犬病毒gB基因,并克隆到pMD20-T载体上作为阳性标准品.通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了一种快速检测伪狂犬病病毒的荧光定量PCR技术.该检测技术具有较高的灵敏性、特异性和可靠性.对制备的pMD-gB阳性标准品的检测结果表明,所建立的伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR最低检测极限可达1.50*102拷贝/反应;同时相比于普通PCR方法其灵敏度高100~1 000倍以上,并且重复性好.在对60份临床样品的检测中,荧光定量PCR不仅检出了普通PCR检测为阳性的样品,且检出了2份普通PCR未检出的样品,进一步证实了该方法快速、灵敏性好,可用于PRV感染的早期快速定量检测和肉类食品进出口检疫.朱淑芬,朱瑞良,乔彩霞,高志强,张利峰,张鹤晓,吴亚琼,王慧珊 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据
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