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锌指蛋白ZBTB20基因重组腺病毒表达载体的构建和鉴定
目的:构建含锌指蛋白ZBTB20基因的重组腺病毒载体,以研究锌指蛋白ZBTB20的生物学功能.方法:将带有FLAG标签的ZBTB20 cDNA片段(ZBTB20-FLAG)克隆至pAdTrack-CMV载体,将该载体与pAdEasy质粒进行细菌内同源重组从而获得重组腺病毒载体pAd-ZBTB20,之后在293细胞中进行包装以及扩增,并对病毒滴度进行检测;采用肝脏组织特异性ZBTB20基因敲除小鼠的原代肝细胞和肝脏组织模型,分别于离体和在体水平鉴定所制备的重组腺病毒Ad-ZBTB20介导的ZBTB20蛋白表达情况;并采用报告基因技术检测过表达的ZBTB20蛋白的功能活性.结果:成功制备了锌指蛋白ZBTB20重组腺病毒,该重组腺病毒感染原代肝细胞和小鼠肝脏组织能过表达ZBTB20蛋白,并且此ZBTB20蛋白能抑制其下游靶基因甲胎蛋白的转录.结论:所构建的ZBTB20重组腺病毒可以介导ZBTB20的过表达并具备转录调节活性,为今后研究ZBTB20的相关生物学功能奠定了基础.朱晓彤,杨瑞,周露婷,张晔,李玲,章卫平,施广霞,陈玉霞 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
5型腺病毒载体对人T淋巴细胞的转染及细胞毒性分析
目的:利用5型腺病毒载体转染人T淋巴细胞,对其转染T淋巴细胞的效率以及细胞毒性进行分析.方法:选取T淋巴瘤Jurkat细胞及原代T细胞,腺病毒按感染复数(multiplicity of infection,MOI)为20、50、100、200和400对其转染,转染48 h后利用流式细胞术检测转染效率;选取腺病毒转染后的不同时点,利用碘化丙啶染色法分析转染对于细胞周期的影响;利用Annexin V/7-AAD染色法分析转染诱导细胞凋亡情况;利用台盼蓝染色计数法分析转染对活细胞数目的影响.结果:5型腺病毒载体转染T淋巴瘤的效率最高,转染效率随着MOI值的增大而增加;CD8+T细胞和CD4+T细胞的转染效率大致相同,T细胞经刺激活化后,CD8+T细胞的转染效率下降;病毒转染未导致明显细胞凋亡;病毒转染对细胞周期与活细胞数目没有显著影响.结论:5型腺病毒载体转染T细胞呈现较低细胞毒性.张文峰,张琼宇,邵红伟,吴凤麟,王腾,黄树林 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
人LMP-1基因腺病毒蚕组体的构建及其在骨肉瘤细胞U20S中的表达
目的:构建表达人LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)基因的腺病毒重组体,体外感染骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)细胞系U2OS,并鉴定LMP-1基因在U2OS中的表达.方法:以K562细胞的cDNA为文库,采用PCR方法对LMP-1进行扩增,通过TA克隆与pGEM-T载体连接并DNA测序.双酶切后并将目的基因插入至腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,对腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1行双酶切和DNA测序鉴定,并通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测pAdtrack-CMV-LMP-1在HEK-293T细胞中的表达.线性化pAdtrack-CMV-LMP-1,在BJ5183菌内完成与骨架质粒pAdeasy-1的同源重组,构建重组腺病毒质粒Ad-LMP-1.通过脂质体介导,在HEK-293A细胞内包装出复制缺陷的重组腺病毒Ad-LMP-1,大量扩增、纯化并测定滴度.用Ad-LMP-1感染OS细胞系U2OS,通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测LMP-1在U2OS细胞中的表达.结果:双酶切和DNA测序鉴定穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1构建成功,荧光显微镜证实转染了pAdtrack-CMV-LMP-1质粒的HEK-293T细胞内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot验证了LMP-1基因的表达量明显高于对照组.通过扩增、纯化,Ad-LMP-1滴度达到1.5*109pfu/ml.荧光显微镜下观察重组腺病毒感染的U2OS内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot检测发现重组腺病毒感染U2OS后,LMP-1的mRNA和蛋白表达量明显高于对照组.结论:成功构建了人LMP-1基因腺病毒重组体,为进一步的实验研究奠定了基础.刘会文,黄路,韩智敏,罗嘉全,杨东,詹平,戴闽,曹凯 - 重庆医科大学学报文章来源： 万方数据 -
IL-24基因重组腺病毒载体转染的树突状细胞促进宫颈癌CaSki细胞凋亡
目的:探讨白细胞介素24(interleukin-24,IL-24)基因重组腺病毒载体转染的树突状细胞(dendritic cells,DCs)是否在体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T-lymphocytes,CTLs)对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应.方法:分离培养小鼠未成熟DCs,将已成功构建的带有IL-24基因的重组腺病毒感染体外培养的小鼠未成熟DCs,提取CaSki细胞裂解物负载DCs,制备DC疫苗,Western blotting检测IL-24蛋白的表达;PE-Annexin V和Western blotting检测细胞凋亡及cleaved caspase-3表达;克隆形成实验检测克隆形成能力;裸鼠荷瘤模型体内研究带有IL-24基因的重组腺病毒载体转染DCs在体外诱导的CTLs对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应.结果:Western blotting检测IL-24蛋白高表达;DCs疫苗诱导产生的CTLs后与CaSki细胞共培养,对CaSki细胞生长具有明显的抑制作用,DCs疫苗诱导产生的CTLs促进CaSki细胞凋亡,增加cleaved caspased-3蛋白表达,克隆形成实验检测该疫苗具有抑制CaSki细胞形成克隆的能力.裸鼠的成瘤实验表明,带有IL-24基因的重组腺病毒载体转染DCs可以抑制体内肿瘤的形成,促进肿瘤细胞凋亡.结论:IL-24基因重组腺病毒感染DCs制备的DCs疫苗可诱导CTLs,从而抑制宫颈癌CaSki细胞增殖,并促进其凋亡.潘巍巍,曹利仙,徐营,沈忠飞,易发平,宋方洲 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
血清病毒特异性IgM抗体检测对小儿病毒感染性疾病早期诊断的临床意义
病毒是引起小儿感染的最常见病原之一,尤其在婴幼儿更为突出.在急性上、下呼吸道感染性疾病中病毒病原占有很大比例.常见的病毒有呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、EB病毒、CMV病毒、单纯疱疹病毒、偏肺病毒、腺病毒.目前从我国刘玉华 - 中国临床医生文章来源： 万方数据 -
Interferon-β-armed oncolytic adenovirus induces both apoptosis and necroptosis in cancer cells
Hongling Huang, Tian Xiao, Lingfeng He, Hongbin Ji, Xin-Yuan Liu - 生物化学与生物物理学报(英文版)文章来源： 万方数据 -
全面性HIV-1镶嵌疫苗在恒河猴中对异源性SHIV的对抗作用
HIV-1的全面多样性意味着开发HIV-1疫苗面临着巨大的困难,常见的情况是所开发的疫苗产生的抗体只能对抗易中和的病毒(easy-to-neutralize virus),而对难中和的病毒(difficult-to-neutralize virus)无能为力.HIV-1镶嵌抗原是根据生物信息学优化设计的免疫原,能改善对HIV-1多样性的覆盖率,然而,至今此类全面性疫苗还没有成功的报道.美以科学家最近的一项工作发现,用基于腺病毒/痘病毒和腺病毒/腺病毒为载体制备的、表达二价镶嵌HIV-1蛋白Env/Gag/Pol免疫原的疫苗对刘紫萍 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
香蕉中内源条斑病毒的基因型及其激活
为明确香蕉中不同基因型内源条斑病毒(endogenous Banana streak virus,eBSV)的激活及其机制,根据eBSOLV-GD(endogenous Banana streak OL virus Guangdong)的结构设计引物,采用内源条斑病毒基因型分析方法及RT-PCR检测法对其基因型、表达和激活进行了研究.结果表明,只含A基因组的香蕉不含eBSOLV-GD;含B基因组的香蕉均含eBSOLV-GD.在所检测的含B基因组的香蕉中eBSOLV-GD可分为6种基因型,部分为感染型的eBSOLV-GD.粉蕉和大蕉中eBSOLVGD的片段Ⅱ和Ⅲ能表达,eBSOLV-GD经组织培养后可激活产生BSOLV-GD,引起香蕉发病,发病率为8.6%~18.0%,表明发病率的高低与香蕉的基因型有关,与eBSV基因型无关.刘春柳,莫俊杰,梁钾贤,黄红,胡汉桥,吴仁锋 - 植物保护学报文章来源： 万方数据 -
受瓜类褪绿黄化病毒侵染的甜瓜茎叶酵母双杂交cDNA文库构建
瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)属于长线形病毒科Closteroviridae毛形病毒属Crinivirus,基因组由2条正义单链RNA构成,RNA1基因组约8.6 kb,RNA2基因组约8 kb,作为2010年报道的新病毒[1],至今已在中国[2]、日本、苏丹[3]和黎巴嫩[4]等地发生.CCYV在黄瓜Cucumis sativus L.和甜瓜Cucumis melo L.叶片上引起典型的褪绿黄化症状,严重影响瓜类的产量和品质.目前关于CCYV的研究主要是病毒基因组序列以及病毒检测的报道,有关基因组编码的病毒蛋白施艳,王英志,孙虎,王振跃 - 植物保护学报文章来源： 万方数据 -
单纯疱疹病毒性脑炎发病机制研究进展
单纯疱疹病毒性脑炎(Herpes simplex virus encephalitis,HSE)又名急性坏死性出血性脑炎,是世界范围内最常见的致死性散发性脑炎,它是由单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)引起的急性中枢神经系统感染性疾病.HSE的发病机制尚未完全清楚.目前认为,病毒基因ICP34.5产物使机体宿主抗病毒的内源性干扰素系统失效而发挥致病作用[1].此外,HSV-1诱导的神经细胞凋亡[2]及其介导的氧化损伤[3]也在发病中余波,曹洁 - 儿科药学杂志文章来源： 万方数据
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